【摘 要】
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目的:1.应用LC-MS/MS代谢组分析方法,探究紫癜性肾炎(HSPN)的发病机制及潜在生物标志物。2.运用网络药理学和分子对接等技术手段,初步探究并验证芪蓟肾康汤(QJD)治疗紫癜性肾炎的治疗机制。材料与方法:1.代谢组学研究材料和方法:样本来源:2019年2月至2019年6月在辽宁中医药大学附属医院确诊的21例5-16岁的紫癜性肾炎患儿(接受芪蓟肾康汤治疗,男11例,女10例)。23例健康儿童
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目的:1.应用LC-MS/MS代谢组分析方法,探究紫癜性肾炎(HSPN)的发病机制及潜在生物标志物。2.运用网络药理学和分子对接等技术手段,初步探究并验证芪蓟肾康汤(QJD)治疗紫癜性肾炎的治疗机制。材料与方法:1.代谢组学研究材料和方法:样本来源:2019年2月至2019年6月在辽宁中医药大学附属医院确诊的21例5-16岁的紫癜性肾炎患儿(接受芪蓟肾康汤治疗,男11例,女10例)。23例健康儿童(男11例,女12例)通过互联网和现场招募。该项目通过了对临床规程的道德审查(2016(KT)-002-01),并在临床试验中完成了临床注册(注册号:NCT02878018)。获得了儿童监护人的知情同意书。诊断依据:根据中国医学会儿科分会肾脏病学分会于2016年制定的循证医学诊断和治疗HSPN的指南,以及Kidney Int Suppl提供的参考资料诊断HPSN。本研究采用芪蓟肾康汤治疗HSPN。收集HSPN患儿及健康儿童的晨尿2ml并将其储存在5m L EP管中,先于-4℃条件下储存30min,然后在-20℃条件下储存24h,最后将其移至-80℃冰箱以便进行后续处理分析,储存期间避免反复冻融,样本分析使用前采用150μL 5%乙腈溶剂复溶,等待后续LC-MS/MS分析。分析样本前,先用空白样本平衡系统;分析样本过程中,每间隔10针样本,需运行1针QC以监测预处理及仪器运行的稳定性。使用SIMCA(version 14.1,Umetrics AB,Umea Sweden)对归一化的数据进行基于多变量统计的模式识别分析。2.网络药理学及分子对接材料与方法依靠中药网络药理学分析平台(TCMSP)检索芪蓟肾康汤主要药物的所有化学成分,借助Uniprot数据库查找预测和筛选所得基因靶点,应用OMIM、GENECARDS及Dis Ge NET等疾病数据库构建HSPN相关靶点数据库,利用R语言进行网络构建及GO与KEGG富集分析,同时联合分子对接对芪蓟肾康汤治疗H S P N机理进行进一步验证。结果:1.LC-MS/MS代谢组结果研究表明,HSPN的发病机制与人体精氨酸生物合成,丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢,柠檬酸循环的异常变化密切相关。2.本课题组通过临床结果和OPLS-DA图表证实了芪蓟肾康汤可以有效治疗HSPN儿童,而S图结果表明胱氨酸和1,3-二甲基尿酸是HSPN的潜在生物标志物。3.网络药理学结果表明:槲皮素(quercetin)、木犀草素(luteolin)、山奈酚(kaempferol)、芒柄花素(formononetin)及异鼠李素(isorhamnetin)可能是芪蓟肾康汤发挥药效的重要成分;PTGS2、PTGS1、F2、ESR1及PRSS1可能是芪蓟肾康汤治疗HSPN的重要靶点;GO及KEGG富集分析表明,芪蓟肾康汤对HSPN的治疗作用可能与人体的抗炎反应、血压调节、精氨酸代谢、血小板活化及Apelin信号通路等密切相关;分子对接展示了芪蓟肾康汤中活性成分可能的作用方式。结论:1.代谢组学研究发现,HSPN的发病机制可能与人体精氨酸合成的异常变化有关,胱氨酸和1,3-二甲基尿酸可能是HSPN的预测生物标志物。2.联合分析代谢组学及网络药理学结果,本研究发现,HSPN可能的发病机制及芪蓟肾康汤的治疗机制都集中于人体精氨酸代谢通路上,这为后续深入研究HSPN的发病机制提供了有力的研究基础。3.分子对接的结果从分子层面为深入芪蓟肾康汤针对HSPN的治疗机制研究提供了可靠的研究指导方向且为芪蓟肾康汤在临床中治疗儿童HSPN的治疗效益及药品研发提供了重要参考依据。
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