【摘 要】
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该研究利用基因体外表达技术,对人肝刺激因子(hHSS)基因分别进行真核及原核细胞的体外表达,旨在证实HSS对离体肝细胞的保护及促增殖作用,并为进一步深入研究HSS结构和作用机
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该研究利用基因体外表达技术,对人肝刺激因子(hHSS)基因分别进行真核及原核细胞的体外表达,旨在证实HSS对离体肝细胞的保护及促增殖作用,并为进一步深入研究HSS结构和作用机制提供功能蛋白.结果表明:真核表达载体pcDNA3.1-hHSS在BEL-7402中稳定表达.转染hHSS基因的肝癌细胞中,hHSS的mRNA表达明显升高,DNA合成有所增加,增殖速度加快,说明HSS基因表达可促进肝癌细胞增殖.hHSS可在pET42a(+)原核表达体系中有效表达,其表达主要以可溶性蛋白和包涵体两种形式,GS-700扫描灰度分析,hHSS融合蛋白表达量占菌体可溶性蛋白中的30﹪,占细菌体总量的15﹪;以多聚组氨酸亲和层析技术(Poly-His.Tag affinity)分离纯化GST/hHSS重组蛋白分子量为48kD;而以Factor Xa切割GST与hHSS之间氨基酸,可得到33kD和15kD两条蛋白带,其中33kD条带与GST分子量相符,经抗His抗体杂效确为GST,而15kD条带的分子量与HSS基因序列推测结果一致.
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