HRP-Luminol-H2O2-PIP化学发光体系在酶免疫分析中的应用

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化学发光酶免疫分析(CLEIA)具有灵敏度高、快速、检测仪器简单、线性范围宽等特点。我们分别建立了两种基于HRP-Luminol-H2O2-PIP体系的化学发光酶免疫分析检测方法,并对其应用进行了研究。1.竞争化学发光酶免疫分析法用于转基因小鼠中β-防御素-2的检测。成功建立了一种竞争化学发光酶联免疫分析方法用于检测转基因小鼠组织中β-防御素-2(pBD-2)的含量。试验结果表明:本方法对pBD-2检测的线性范围为0.05-80ng mL-1(r2=0.9960),检测限为3.5 pg mL-1(3σ);在30 ng mL-1pBD-2时测得的相对标准偏差为3.94%(n=11)。通过对转基因小鼠组织中pBD-2测得的结果和RT-PCR测定的pBD-2 mRNA水平进行对比,结果表明:转基因小鼠组织中pBD-2蛋白水平分布和pBD-2mRNA水平分布总体相似,但不完全一致,这是由于pBD-2蛋白水平和pBD-2mRNA水平并不是简单的线性关系造成的。这一结果表明建立灵敏的pBD-2蛋白水平分析方法的必要性和重要性。2.芽孢@胶体金功能微球的制备及用于猪传染性胸膜肺炎检测的研究。编码微球悬浮阵列技术正在替代传统酶联免疫吸附试验和平面阵列技术。本论文证明了枯草芽孢杆菌芽孢是制作编码微球良好的载体:通过将胶体金吸附到芽孢表面制备的功能微球;然后将芽孢@胶体金微球用于免疫分析检测动物疾病。试验结果表明:芽孢@胶体金微球可以满足对动物疾病日常诊断的需要,具有良好的开发应用前景。
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