低温脂肪酶菌株的筛选及酶学性质研究

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由于低温脂肪酶在低温条件下(0℃~30℃)具有良好的催化特性,Kcat值和生理效率(Kcat/Km)高,活化能较低,可以节约能源、保护环境,因此已成为国内外酶学研究的热点。本论文进行了低温脂肪酶产生菌的筛选、菌株鉴定、酶学性质和发酵工艺研究,主要内容如下:从新疆具有典型低温环境地区的近200份土样中筛选分离到11株产低温脂肪酶的菌株,对其中一株酶活较高的菌株GL-1,经形态观察、生理生化鉴定、26S rDNA测序分析为茁芽丝孢酵母菌。对GL-1菌株产的低温脂肪酶进行硫酸铵分级沉淀,在20%~60%饱和度的条件下,纯化倍数最高。将初步纯化后的脂肪酶酶液,进行酶学性质研究。该酶的最适反应温度在25~30℃之间,属低温脂肪酶,最适反应pH为6.5。30℃以下保温80 min仍可保持80%左右的酶活力,而温度超过40℃酶活迅速下降。在pH 3~10的范围内,具有比较良好的pH稳定性。K+对本低温脂肪酶具有一定的激活作用,Cu2+、Mn2+对酶具有不同程度的抑制作用。对GL-1菌株进行产酶条件的优化,初步确定该菌株产低温脂肪酶的最适发酵培养条件为(%):葡萄糖1、豆饼粉2、玉米浆3、K2HPO4 0.5、NaNO3 0.5、橄榄油0.25、Tween80 0.1、初始pH 7、250 ml三角瓶装液50 ml、种龄为24 h、接种量为4%、20℃、175 r/min摇床培养48 h,酶活最高可达7.17 U/ml。正交实验分析可得出玉米浆对产酶的影响较大,添加适量的油脂对产脂肪酶有诱导作用。
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