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目的:研究真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factors2,eIF2α)抑制剂salubrinal(sal)协同雷帕霉素(rapamycin,rap)对人胆管癌细胞的抑制效果及其分子机制。 方法:培养人胆管癌细胞系QBC939和RBE细胞,用rap抑制胆管癌细胞mTOR信号通路,采用eIF2α抑制剂sal单独或与rap联合处理细胞、Bcl-xL抑制剂ABT-737单独或与rap联合处理细胞,通过向裸鼠皮下注射QBC939实现荷瘤,荷瘤后给不同实验组加相应的药物进行干预,监测小鼠荷瘤效果,用免疫印迹分析药物干预后肿瘤细胞和成瘤癌组织中相关分子以及凋亡相关分子PARP、Cleaved Caspase-3表达水平,用CCK-8检测细胞增殖速率,免疫组化分析药物干预对小鼠荷瘤组织增殖的影响。 结果:(1)Rap抑制CCA细胞增殖:免疫印迹(Western blot)分析结果说明rap可以抑制CCA细胞中mTOR通路的活化,CCK-8检测证实rap对QBC939和RBE细胞的增殖起抑制作用,并且呈时间依赖性抑制(P<0.05);此外,rap未引起QBC939和RBE细胞明显凋亡(数据未展示);(2)Sal抑制CCA细胞增殖:Western blot结果表明eIF2α/ATF4信号通路在CCA细胞中呈过度活化状态,并且sal可以抑制eIF2α的活性, CCK-8检测证实sal对QBC939和RBE细胞的增殖起抑制作用,并且呈时间依赖性抑制(P<0.05);此外,sal未引起QBC939和RBE细胞明显凋亡(数据未展示);(3)Sal抑制CCA细胞成瘤:在体内实验中,sal抑制QBC939在裸鼠体内的荷瘤能力,并通过免疫组化证实sal抑制QBC939细胞体内细胞增殖能力;(4)Sal和rap联合应用抑制CCA细胞成瘤:在裸鼠体内sal和rap单独干预抑制QBC939细胞的成瘤,二者联合干预协同抑制QBC939细胞的成瘤;(5)Sal和rap联合应用协同抑制CCA细胞成瘤的机制:免疫组化证实sal和rap联合干预比单独sal或rap干预表现出对荷瘤的QBC939细胞生长更强的抑制作用;在体外实验中,CCK-8分析结果提示sal和rap对QBC939细胞增殖有协同抑制作用(P<0.05)。用Western blot分析表明在QBC939细胞中sal处理不仅可以下调p-AKT的表达还可消除rap诱导的p-AKT表达上调;在体外实验中,Western blot结果表明sal和rap单独或联合应用未引起QBC939和RBE细胞中PARP和Caspase-3的活化剪切;而且在体内实验中,Western blot结果证实sal或rap单独干预未引起荷瘤的QBC939中PARP和Caspase-3的活化剪切,而联合应用时引起了PARP和Caspase-3明显的活化剪切,并且sal处理可以消除rap诱导的p-AKT和Bcl-xL表达上调;用Bcl-xL抑制剂ABT-737处理后抑制QBC939细胞成瘤,并且 ABT-737和rap联合应用比ABT-737或rap单独干预表现出对QBC939细胞成瘤的更强抑制效应;Western blot结果表明在QBC939成瘤组织中,ABT-737和rap联合应用引起了PARP和Caspase-3明显的活化剪切;Western blot结果证实,ABT-737和rap联合应用在培养的QBC939细胞中引起了PARP和Caspase-3明显的活化剪切。 结论:Sal和rap联合应用对胆管癌细胞有协同的抑制效应;Sal和rap可以部分通过调控p-Akt和Bcl-xL表达实现对胆管癌细胞的协同抑制效应。