香菇菌糠多糖的制备及其抗氧化、抗炎症和肺保护作用的研究

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菌糠是食用菌栽培收获后产生的培养基剩余物,其中富含多糖等生物活性物质。近几年,食用菌产业兴盛的同时也产生了大量菌糠,而大量菌糠的随意丢弃既造成了资源浪费,同时也造成了严重的环境污染。因此,菌糠的合理有效利用变得日益重要。本课题以水提香菇菌糠多糖(Lentinula edodes residue polysaccharides,LRP)、酸解香菇菌糠多糖(Acidolysis Lentinula edodes residue polysaccharides,Ac-LRP)和酶解香菇菌糠多糖(Enzymolysis Lentinula edodes residue polysaccharides,En-LRP)为研究对象,分析了三种菌糠多糖的体外抗氧化能力,对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)小鼠中肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)的各种炎性细胞因子含量、血清各指标和肺组织中抗氧化酶活性等进行了检测;比较了香菇菌糠多糖的键型、单糖组成等,实验结果如下:(1)采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析对三种多糖进行分离纯化,得到不同的多糖组分。其中LRP得到两个组分,Ac-LRP得到一个多糖组分,En-LRP得到两个组分。气相色谱(Gas chromatographs,GC)法的实验结果表明LRP含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其质量分数为12.96%、27.36%、3.64%、9.81%和46.23%;Ac-LRP含有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖,其质量分数为32.47%、22.53%、8.30%和36.70%;En-LRP含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其质量分数为81.97%、4.63%、2.93%、4.75%和5.72%。傅立叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)的分析结果表明三种多糖均具有多糖的特征吸收峰,其中LRP是α-型糖苷键连接的吡喃糖,Ac-LRP和En-LRP是β-型糖苷键连接的吡喃糖。(2)采用一系列体外抗氧化指标(还原力、羟基自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基)测定了LRP、Ac-LRP和En-LRP的体外抗氧化能力。最终研究发现,多糖的抗氧化能力随着浓度的升高而逐渐增强。在同等浓度下,En-LRP的还原力和自由基清除能力高于LRP和Ac-LRP。(3)通过LPS腹腔注射建立ALI小鼠模型,分析LRP、Ac-LRP和En-LRP的抗氧化、抗炎及其肺保护能力。实验结果表明,LRP、Ac-LRP和En-LRP可以显著降低ALI小鼠肺组织的湿/干重比和髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的活性、小鼠BALF中的TNF-α、IL-1β、IL-6三种细胞因子的含量、小鼠血清中补体3(Complement 3,C3)和超敏C反应蛋白(High-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)水平,并且降低ALI小鼠肺组织中的丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和脂质过氧化物(Lipid peroxidation,LPO)的水平。同时,小鼠肺组织中抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)和总抗氧化能力(T-AOC)活性显著上升。另外,肺组织的形态学观察表明三种菌糠多糖,尤其是En-LRP,可以显著改善ALI小鼠产生的病理学变化。结果表明,LRP、Ac-LRP和En-LRP具有抗炎和肺保护的功效。上述结果表明,LRP、Ac-LRP和En-LRP具有一定的体内外抗氧化能力,对改善LPS诱导的ALI小鼠肺组织的一系列生理性病变具有明显效果,为研发一种治疗急性肺损伤的天然药物开辟了新道路。本课题同时为LRP、Ac-LRP和En-LRP的抗氧化机制及其构效关系的研究奠定了基础。
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