【摘 要】
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目的将正常人角质形成细胞(KC)重编程生成的诱导多潜能干细胞(iPSCs)进行体内畸胎瘤实验,旨在证明其具有向多个胚层类型细胞分化的潜能。方法将iPSCs悬液注射至裸鼠体内,观察种植部
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目的将正常人角质形成细胞(KC)重编程生成的诱导多潜能干细胞(iPSCs)进行体内畸胎瘤实验,旨在证明其具有向多个胚层类型细胞分化的潜能。方法将iPSCs悬液注射至裸鼠体内,观察种植部位肿瘤生长情况。成瘤后无菌摘除瘤体,等分为二,一份行HE染色和免疫组化检测,一份组织消化后分别用KC、M254、DMEM培养基体外培养,倒置显微镜和免疫荧光显微镜观察,培养细胞行免疫化学检测。结果接种后8周后裸鼠体内肿瘤生长至0.36cm3,瘤体HE染色见细胞呈团片状分布,核大深染,核仁明显,胞浆丰富,大小形态较一致,核分裂易见。瘤体组织免疫组化标记: Vimentin(+),Ki-67(+),CK(pan)(+),Oct3/4(+),GFAP(-),AFP(-)。肿瘤组织细胞培养一周后,倒置显微镜下观察: KC培养基内细胞贴壁生长,呈多角形,排列紧密,部分立体生长。M254培养基内细胞贴壁生长,呈长梭形,排列稀疏,可见树突状结构。DMEM培养基内细胞贴壁生长,呈梭形或椭圆形。免疫荧光显微镜下DMEM、KC、M254培养基内均可见强免疫荧光表达细胞。KC培养基细胞行免疫化学标记:Vimentin(+),CK(pan)(+),Oct3/4(+),Ki-67(+),GFAP(—),AFP(—)。结论体内畸胎瘤实验能形成两个胚层细胞来源的肿瘤,证明KC来源的iPSCs具有向多个胚层类型细胞分化的潜能。
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