高脂血症(Hyperlipemia,HL)是动脉粥样硬化形成的一个重要危险因素,动脉粥样硬化早期升高的氧化低密度脂蛋白和胆固醇可对动脉内膜功能性损伤,影响内皮功能。.内皮在维持血管完整性有着重要的作用,内皮损伤在动脉粥样硬化病程中有着始发作用,与动脉粥样硬化、急性冠脉综合症、高血压等多种心血管疾病发展和病理有着密切联系。动脉粥样硬化过程进行性发展会导致严重心脑血管突发事件,患者预后差,严重影响生存及生活质量。早期干预血脂所致的动脉损伤,并修复血管,阻断动脉粥样硬化病情进展,在控制心血管急性事件发生中有着重要的作用。动脉粥样硬化早期变化为内皮损害,一氧化氮合酶(NOS)表达及相关辅助因子系统改变,导致一氧化氮(NO)破坏增加,NO的合成减少,内皮依赖性舒张功能调节失衡,可导致动脉粥样硬化形成。通过合理升高NO水平能够改善内皮功能,从而阻止动脉粥样硬化病情进展。脂联素(ADP)是一个与体脂含量呈负相关的脂肪细胞因子,已证实其具有广泛的生物学活性,如抗炎,增加胰岛素敏感性等,低脂联素血症日渐成为心血管疾病的独立危险因素。脂联素受体(AdipoR)1/2调节脂联素调节的胰岛素敏感性,AdipoR1/2表达于骨骼肌和肝脏,其可能在调节ADP抗炎作用,改善内皮细胞功能障碍。过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)作为转录因子属于核受体超家族。吡格列酮为PPARγ激动剂,不仅能调节脂质代谢,而且能通过抑制血管的炎症反应、提高纤维溶解系统活性、改善内皮细胞功能,降低C反应蛋白质水平。但其改善主动脉血管功能机制尚不明确。因此笔者采用高脂饮食建立高脂血症大鼠主动脉损伤模型,探讨吡格列酮对高脂血症大鼠主动脉损伤进程的干预作用及机制,为吡格列酮抗动脉粥样硬化提供理论支持。目的：通过观察吡格列酮对高脂血症大鼠血浆脂联素(ADP)、主动脉一氧化氮(NO)、抑制型一氧化氮合酶(iNOS)、结构型一氧化氮合酶(cNOS)、总一氧化氮合酶(tNOS)的改变和脂联素受体(AdipoR)的表达改变及吡格列酮的干预影响,探讨吡格列酮可能的作用机制,为吡格列酮抗动脉粥样硬化提供理论依据。方法：前12周,27只雄性SD大鼠经随机数字表随机分为两组,随机分为正常对照组9只、高脂饮食组18只,进行造模实验。12周后,存活的造模组17只大鼠按随机数字表随机分为模型组、毗格列酮组。对照组喂以标准大鼠饲料,造模组依据给予高脂饮食(胆固醇2%、胆酸盐0.5%、甲基硫氧嘧啶0.2%和72.3%基础饲料)喂养,喂养12周后,第12周末从眼眶后静脉抽血检测血脂水平以确定模型是否复制成功,并检测血糖(blood glucose,BG)水平。随后将高脂饮食组大鼠随机分为模型组和毗格列酮组,吡格列酮组：吡格列酮10mg·kg-1·d-1连续灌胃,对照组和模型组：双蒸水灌胃,1.5 ml/100g体重,1次/日；均灌胃4 w。给药4周后,禁食24小时,于次日上午8时,用20%氯胺酮,以1 ml/100g剂量麻醉后,剪开胸腹腔,暴露心脏,左心室穿刺取血5 mll,室温静置1小时后,3000转/分离心5分钟,分离血清置-20℃冰箱保存,待测血清指标；于冰盘中分离主动脉,并在主动脉弓与胸主动脉交界处取材,用10%中性甲醛固定作HE病理检测,剩余主动脉组织置液氮中保存待测其他指标。吡格列酮干预4周后,检测各组血脂水平,三酰甘油(TG)用TPO-PAP法检测,总胆固醇(TC)用CHOD-PAP法检测,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)用选择性沉淀法检测,并检测BG。用伊红染色法、免疫组化染色显示血管内皮细胞后采用光镜观察、电镜观察内皮细胞微观结构。酶联免疫法检测血清ADP、硝酸还原法测血清和主动脉NO、精氨酸催化法检测主动脉tNOS、iNOS及cNOS(等于tNOS与iNOS之差)的水平。蛋白免疫印迹杂交法测主动脉脂联素受体1和2蛋白水平、实时荧光定量PCR法测主动脉脂联素受体1和2基因表达。光镜和电镜观察主动脉形态学改变。主动脉NOS-NO,脂联素及其受体下降可能介入高脂血症血管损伤,吡格列酮具有抗动脉粥样硬化作用,该作用可能与提高血清ADP和主动脉血管AdipoR表达有关。统计方法：统计软件使用SPSS13.0进行分析,定量数据以均数±标准差(x±s)表示；两组资料比较若方差齐,用独立样本的t检验,若方差不齐,用Welch校正t检验；多组间比较用完全随机化设计资料的方差分析,若方差齐,则采用LSD检验进行两两比较,若方差不齐用Dunnett’s T3检验。P≤0.05认为有统计学意义。结果：1.大鼠血脂、血糖变化吡格列酮干预前,造模后第12周高脂饮食组TG、TC、LDL-C较对照组明显升高(P<0.01), HDL-C、BG高脂饮食组较对照组差异无统计学意义(P=0.091,P=0.884)。经吡格列酮干预4周后,模型组较正常对照组TG、TC明显升高(P<0.01),吡格列酮组较模型组TG、TC显著下降(P<0.01); TG、TC吡格列酮组较对照组差异无统计学意义(P=0.562,P=0.931)。对照组、模型组、吡格列酮组间HDL-C、LDL-C、BG差异无统计学意义(P=0.884,P=0.177 P=0.860),但吡格列酮组HDL-C有升高趋势。2.大鼠主动脉形态学改变2.1主动脉病理HE染色形态改变对照组主动脉内皮未见明显改变,内皮保持连续性、内膜完整、未见平滑肌增厚；模型组出现脂质沉积,部分内膜增厚,平滑肌紊乱、增生,内皮断裂,缺如；吡格列酮组内膜及平滑肌未见明显改变。2.2光镜显示形态学改变第八因子相关CD31抗体显示血管内皮细胞后采用光镜观察,对照组大鼠主动脉内皮光滑平整,平滑肌组织分布均匀。模型组大鼠主动脉内皮组织大部脱落,平滑肌明显增生,排列紊乱,细胞肥大,垂直于内膜。吡格列酮组主动脉内皮基本完好,偶有脱落,平滑肌细胞增殖不明显,排列规则,形态基本正常。2.3电镜血管内皮细胞超微结构改变对照组大鼠血管内皮细胞正常,胞浆内线粒体正常,胞核结构正常,内弹力膜连续,厚薄均匀,平滑肌细胞正常。模型组大鼠内皮细胞病变较重,胞膜破裂,胞质脱失、外溢或疏松变性,胞质内细胞器溶解或消失,胞核染色质疏松,电子密度减低,核膜不完整；内皮下纤维母细胞增生变,胶原纤维增多。内弹力膜中断,厚薄不一,有灶性溶解,中膜平滑肌细胞脂质沉淀,呈泡沫样改变。吡格列酮组大鼠血管内皮层整齐,内皮细胞几乎正常,偶见内皮细胞的线粒体水肿,中膜的平滑肌细胞偶有线粒体水肿及泡沫样变。3.主动脉NO和NOS活力的改变模型组主动脉NO水平低于对照组(P<0.01)；而吡格列酮组与对照组间差异无统计学意义(P=0.490)：吡格列酮组与模型组间差异有统计学意义(P<0.01)：模型组较对照组cNOS下降(P<0.01),吡格列酮组与对照组间差异无统计学意义(P=0.444)吡格列酮组较模型组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。通过经完全随机化方差分析得出各组间iNOS、tNOS活力改变差异无统计学意义(P=0.389,P=0.189)。4.血浆ADP水平改变模型组血浆ADP较对照组脂联素水平明显下降(P<0.01),吡格列酮组血浆ADP水平明显升高(P<0.05)。吡格列酮组与对照组相比差异无统计学意义(P<0.518)。5.主动脉AdipoRmRNA和AdipoR蛋白表达模型组AdipoR1mRNA水平低对照组(P<0.01),吡格列酮组与模型组间差异有统计学意义,高于模型组(P<0.01),对照组与吡格列酮组间未见明显统计学意义(P=0.062)。模型组AdipoR2mRNA水平低于对照组(P<0.01)，吡格列酮组与对照组比较未见统计学差异(P<0.191),格列酮组与模型组间有统计学差异,高于模型组(P<0.01)。模型组AdipoRl蛋白水平低对照组(P<0.01),吡格列酮组与模型组间差异有统计学意义,高于模型组(P<0.05)。吡格列酮组与对照组之间差异无统计学意义(P=0.182)。模型组AdipoR2蛋白水平低于对照组(P<0.01),吡格列酮组与对照组比较未见统计学差异(P=0.068),吡格列酮组与模型组间有统计学意义,高于模型组(P<0.01)。结论：1.高脂饮食造成高脂血症出现,大鼠TG、TC、LDL-C显著增高,成功复制了高脂血症大鼠模型；病理显示血管内皮断裂,缺如,内膜增厚,平滑肌紊乱、增生。2.观察到模型组大鼠主动脉NO、cNOS水平下降,血浆ADP的浓度显著下降,同时荧光实时定量PCR及Western Blotting结果显示主动脉AdipoRmRNA及其蛋白合成减少；3.吡格列酮能明显改善高脂血症大鼠主动脉损伤,可能与降低血脂水平(TG、TC),提高血浆ADP、主动脉NO、NOS水平及主动脉AdipoRmRNA表达及其蛋白合成有关；4.吡格列酮具有保护血管组织,抑制内皮损伤作用,该作用可能与增加主动脉AdipoR表达,提高血浆ADP水平,促进主动脉cNOS-NO生成有关。