近年来,嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum,AP)已成为全球范围内一种危害公共健康的重要蜱传病原。这种革兰氏阴性菌营专性胞内寄生,主要感染宿主动物的末梢血中性粒细胞,其宿主谱十分广泛,包括人、野生动物(如白尾鹿、梅花鹿等)、家畜(如犬、马、牛、羊等)、啮齿类动物(如白足鼠、林鼠等)、食虫类动物(如鼩鼱、刺猬等)。该病原在人体内可引起人粒细胞无形体病(Humangranulocyticanaplasmosis,HGA),在动物体内则可导致蜱源热(Tick borne fever,TBF),给养殖业的发展造成重大损失,并可危及人类健康。然而该病原在我国动物中的流行情况还不甚明了,且AP不同分离株之间差异较大,因此,详细了解我国部分地区、不同动物和媒介蜱AP的流行情况以及不同AP分离株之间的遗传差异,对于深入研究嗜吞噬细胞无浆体病的发生和流行情况,进而有效防控该病及保护动物健康和公共卫生安全等具有重要意义。1.AP分子流行病学调查2013年—2015年,为详细了解我国AP流行情况,自河南、陕西、云南、贵州等9个省(市、自治区)采集绵羊、山羊、牛、犬、非洲长颈鹿血液样品2104份,其中羊血液样品1516份(含本实验室保存羊血液样品474份)、羊奶样品120份、牛血液样品69份、犬血液样品240份、非洲长颈鹿血液样品1份和硬蜱样品158份,采用血液涂片姬姆萨染色法、硬蜱透明镜检法和巢式PCR方法特异性扩增AP、Anaplasma bovis 16S rRNA和Anaplasma ovismsp4基因片段。结果显示,共计2053份DNA样品中,无浆体总阳性率为38.4%(788/2053),3.0%(61/2053)为AP阳性。其中在1516份羊血液样品中,无浆体总阳性率为45.0%(683/1516),AP阳性率为3.4%(52/1516):不 品种羊的无浆体阳性率也不同,绵羊无浆体总阳性率为40.6%(262/646),AP的感染率为5.6%(36/646),山羊无浆体总阳性率高达51.3%(424/870),AP阳性率1.8%(16/870),低于绵羊中AP感染率;连续4年采集自河南洛阳宜阳赵堡乡的羊血样品中,无浆体总阳性率高达78.2%,其中AP阳性率也高达47.3%(78/165),这可能与该地区位于豫西山区且羊群多以放牧为主而与媒介硬蜱接触较多有关;12.5%(15/120)的羊奶样品为无浆体阳性,其中AP阳性的羊奶样品2份,且凡是羊奶样品检测为某种无浆体阳性者,其对应的血液样品也为该种无浆体阳性:69份牛血样品中,31.9%(22/69)为无浆体阳性,1份为AP阳性,有部分样品同时感染4种病原;血液涂片染色、PCR检测及牛体表硬蜱携带病原检测三方面的结果共同证实来自该牛场的牛患有泰勒虫病/无浆体病;240份犬血液样品中,有3份流浪犬样品和1份羊场饲养的犬样品为AP阳性;107份蜱样品经种类鉴定后为:85份长角血蜱,16份微小扇头蜱,6份褐黄血蜱,其中1只长角血蜱为AP阳性;首次从动物园引进饲养的非洲长颈鹿体内检测到AP,以及AP、A.bovis和Theleria sp.的混合感染。上述结果表明在本研究采样地区的动物体内无浆体感染较普遍,且多种动物均感染AP,这提示我们关注AP对畜牧业造成的影响,另外在林牧区的工作人员和旅行者应加强自我保护意识,避免因被蜱虫叮咬而罹患无浆体病。2.AP的遗传差异分析为了解我国部分地区AP的遗传差异,对所获得的220份AP阳性样品,采用巢式PCR方法特异性扩增得到AP的16SrRNA、msp4、groESL和gltA四个基因的部分序列,应用Vector NTI Advance10软件对序列进行校对及拼接,将所得序列在NCBI的BLASTn中进行同源性比对,随后使用Mega5.05软件对核苷酸序列及由其推倒出的氨基酸序列进行分子发育分析并构建进化树。本文共得到16SrRNA基因长片段31条,gltA基因序列118条,groEL基因序列162条,msp4基因序列52条。31条16SrRNA基因长片段中,有12条差异序列,其中,序列KX505292为查菲氏埃里希氏体(Ehrlichia chaffeensis),且与美国的一人源分离株(CP007479)位于同一个进化分支上,KX505293和KX505302代表的分离株与一株来自中国的人源无浆体分离株(KM206273)序列相同;118条gltA核苷酸序列中,存在8种有差异序列,推倒出的氨基酸序列存在7种序列,氨基酸序列构建的进化树上,本文得到的gltA形成两支,其中,cluster Ⅰ中包含了绝大部分序列,且包含一株人兽共患分离株KJ700628;162条groEL核苷酸序列,存在10种有差异核苷酸序列和3种差异氨基酸序列,氨基酸和核苷酸序列的进化树上均显示,本文得到的序列单独成支,与现有序列差异较大,相似度最高的也仅有90.3%(JN055360和JQ685509);52条msp4核苷酸序列存在13种核苷酸序列和3种氨基酸序列,本文得到的序列在进化树上形成分离的两个支,clusterⅡ中囊括了除来自陕西麟游、山西晋城和河南洛阳宜阳的部分分离株,可见陕西麟游和山西晋城地区的msp4基因序列相对保守,而河南洛阳宜阳地区的msp4基因则出现分化;220份16S rRNA基因短片段的进化分析显示,本文的序列分成三簇,其中cluster Ⅰ涵盖了本文得到的绵羊、山羊、犬、牛、长颈鹿、蜱来源的AP分离株序列以及已报道的其他动物源分离株,clusterⅢ中仅有的一条序列与两株人源分离株亲缘关系较近(NR044762和AF093788),显示一定的人兽共患倾向。基于16S rRNA基因长片段和gltA基因的遗传差异分析显示,本文得到的部分AP分离株可能具有一定的人兽共患风险,具有重要的公共卫生学意义;基于groEL的进化分析则表明本文得到的分离株与现有已报道分离株亲缘关系较远;而本文得到的AP分离株的msp4基因遗传差异较大,为AP的遗传差异分析提供了重要的理论依据。