竹叶花椒中黄酮类化合物抗氧化的谱效关系研究

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天然抗氧化剂具有安全、绿色、环保等特点,与化学合成的抗氧化剂相比,具有更低的毒副作用。竹叶花椒中含有天然黄酮、木质素、挥发油和生物碱等多种活性成分,具有抗衰老、抗炎、抑菌、杀虫、抗氧化和抗癌等药理功效;作为一种药食同源的经济作物,其含有的黄酮类化合物可作为天然抗氧化剂研究的原材料。目前竹叶花椒主要用于调味品行业,为了开发新的天然抗氧化剂,开发竹叶花椒的生物医药应用价值,本文对其黄酮类化合物的提取和抗氧化活性及其谱效关系进行了较系统的实验研究。论文探究了竹叶花椒中黄酮类化合物的富集纯化工艺条件,并对提取物的结构特征进行研究;考察了10批不同来源竹叶花椒黄酮的抗氧化活性和其HPLC指纹图谱,并对其谱效关系进行研究,为竹叶花椒黄酮抗氧化的药效物质基础研究提供实验数据。(1)利用聚酰胺-大孔吸附树脂联用法探究竹叶花椒黄酮提取物纯化工艺参数,得到其最佳纯化工艺参数为:洗脱液为40%乙醇水溶液,样品与聚酰胺用量比为1:3,样品与大孔吸附树脂用量比为1:9。利用现代分析测试技术对黄酮提取物的结构特征进行表征,结果表明:所得提取物具有黄酮类化合物C6-C3-C6的典型结构;提取物为无定型粉末;提取物形貌为直径1微米左右的均匀球状;受激时提取物发出蓝色和红色的荧光,波长分别在450 nm和670 nm左右;提取物在室温~800℃范围内的失重率达60%。(2)利用DPPH和ABTS法测定竹叶花椒黄酮提取物的抗氧化活性,其结果表明:竹叶花椒黄酮提取物具有较强的抗氧化活性,且经过纯化后的黄酮抗氧化活性得到明显提高;10批次竹叶花椒黄酮提取物清除DPPH·的IC50值在14.530~20.833μg·m L-1之间,清除ABTS+·的IC50值在8.101~12.785μg·m L-1之间,竹叶花椒黄酮提取物清除ABTS+·的能力整体高于DPPH·。(3)利用液-质联用法共分析鉴定出竹叶花椒中的10种黄酮类化合物,分别为表儿茶素、阿福豆苷、金丝桃苷、芦丁、紫云英苷、槲皮苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、异鼠李素、槲皮素和山奈酚;建立了10批次竹叶花椒黄酮的HPLC叠加指纹图谱,其相似度在0.870~0.989之间,共得到16个特征共有峰。(4)利用偏最小二乘回归和灰色关联度法对竹叶花椒黄酮类化合物抗氧化活性的谱效关系进行分析,结果表明16个共有峰中峰5、6、9、12、13和16所代表的化合物是竹叶花椒黄酮抗氧化的主要活性成分,其中峰5、12、13和16分别是表儿茶素、金丝桃苷、紫云英苷和山奈酚。
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