一种引起肉仔鸡免疫和生长抑制病的新病毒的初步鉴定及免疫检测方法的建立

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鸡免疫和生长抑制病病毒是近年来严重危害养鸡业的一种新的疾病。我们从发生免疫和生长抑制病的肉仔鸡中分离到了一种新的病毒,对其生物学特性、理化特性、形态特性等方面进行了初步鉴定,并建立了间接ELISA和间接IFA检测方法。 1.负染法电镜观察发现,人工感染的SPF鸡胚尿囊液中有直径为40-70nm的病毒粒子存在,呈不规则的六边形,近似圆形或椭圆形,有3~5nm纤突。人工感染的SPF鸡胚和鸡的腺胃、小肠、肝脏和肾脏超薄切片电镜也发现组织细胞的细胞核内有类似病毒粒子。 2.病毒生物学特性试验表明,该病毒为RNA病毒,通过尿囊腔接种,可在10日龄SPF鸡胚上生长,接种后3-5天可引起鸡胚规律性死亡,病毒在10日龄SPF鸡胚上增殖的高峰为接种后72h。用Vero细胞、PK15和鸡胚成纤维细胞(CEF)进行适应性培养,未能成功。 3.理化特性试验结果表明,该病毒对20%乙醚有较强的耐受性,对4.8%氯仿有一定的耐受性,初步说明该病毒无囊摸。在pH4~10范围内37℃2h病毒完全耐受。在酸性(pH3.0)环境中37℃ 2h,仍有病毒能存活;在碱性(pH11.0)环境中37℃ 2h病毒完全灭活;在60℃下30min病毒完全灭活,而56℃下30min病毒仍有耐受性。 4.制备出了兔抗鸡免疫和生长抑制病毒免疫血清。经病毒中和试验和琼脂扩散试验,表明该病毒存在中和抗原,而无琼扩抗原。制备的兔抗鸡免疫和生长抑制病病毒免疫血清的中和效价PD50为1/104。 5.利用自制的阳性兔抗鸡免疫和生长抑制病病毒免疫血清,在实验室条件下建立起了间接酶联免疫吸附试验法(间接ELISA)和间接免疫荧光法(IFA)两种免疫检测方法。间接ELISA法的最佳反应条件为包被抗原的最佳稀释度为1:100,酶标二抗的最佳稀释度为1:1000,底物最佳反应时间为30分钟。间接免疫荧光(IFA)的最佳反应条件为兔抗该病毒免疫血清的最佳稀释度为1:10,羊抗兔IgG-FITC荧光二抗最佳稀释度为1:100,感作时间为45min。经特异性和重复性试验,表明两种方法均具有一定的特异性和可重复性。两种检测方法结合人工感染SPF鸡胚电镜观察结果,证明两种方法之间有着很好的符合性。 6.根据本试验研究结果,与其它免疫抑制病病毒及相关病毒科进行特性比较,初步将该病毒归为双RNA病毒科禽双RNA病毒属的一个新病毒。
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