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前言在恶性肿瘤中,细胞的增殖超过了肿瘤的能量供应,因此细胞对氧和营养的过度消耗可导致肿瘤微环境为低氧、低糖和酸性,这种情况在实体肿瘤中更明显。在乏氧状态下,组织通过有氧氧化获得能量的能力明显降低,而更主要的是通过无氧糖酵解来满足肿瘤生长需要的大量能量。这意味着为满足细胞快速生长增殖的高能量需求,细胞要摄取大量糖,葡萄糖转运蛋白1 (glucose transporter 1, Glutl)表达异常升高可能为癌细胞摄取葡萄糖增多的机制之一。缺氧诱导因子1 a(hypoxia inducible factor-1 a, HIF-1 a)是介导细胞对缺氧微环境进行适应性反应的关键性转录调控基因,能激活许多缺氧反应性基因的表达,使组织产生一系列适应反应而得以在缺氧状态下生存。其中就包括HIF-1a可以促进肿瘤细胞葡萄糖转运蛋白(Glut)基因的表达,以满足肿瘤生长的能量需求。因胆管癌近几年的发病率明显升高,同时胆管癌的预后较差,目前尚无胆管癌(cholangiocarcinoma)组织中Glutl与HIF-1a表达相关性的研究报道。本研究主要探讨胆管癌组织中Glutl与HIF-1a表达及意义。材料和方法一、一般资料标本来源选择中国医科大学附属盛京医院病理科存档石蜡包埋标本(2005年1月-2008年12月)手术切除原发性肝外胆管癌标本90例。所有标本术前均未进行放化疗,并经病理确诊胆管癌组织,对照为5例正常胆管组织。病例标本中男性例数为:47例,女性标本为:43人。5例正常胆管组织。年龄34-75岁,平均61岁,按胆管癌病理分级:高分化28例,中分化38例,低分化24例。淋巴结转移34例。无淋巴结转移者为56例。按UICC分期标准进行分期,Ⅰ期22例,Ⅱ期34例,Ⅲ期25例,Ⅳ期9例。二、实验方法及试剂1、主要试剂兔抗人Glutl (bs-0472R)多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司,兔抗人HIF-la (bs-0737R)多克隆抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司。2、实验方法用S-P法免疫组化染色,Glutl滴度1:200,HIF-1a抗体的工作浓度为1:200,步骤按说明书操作,DAB显色,同时用PBS代替—抗作阴性对照,用已知的阳性切片作阳性对照。3、观察对于上述染好的切片请1位对病情不了解的病理科医生观察染色结果,Glutl的阳性着色为细胞膜上棕黄色颗粒;HIF-1a蛋白阳性表达为胞质出现棕黄色颗粒。在高倍镜下(×400)随机选择5个视野,各计数200个细胞,共计1000个,观察着色强度并计算每张切片阳性细胞百分率。Glutl阳性分级标准:先按着色强度打分:无色0分,浅黄色1分,棕黄色2分,棕褐色3分;再按阳性细胞所占百分比打分,参考Cooper等的报道:无阳性细胞数为0分,阳性细胞数<10%为1分,10%-50%为2分,>50%为3分;着色强度与阳性细胞百分比的乘积:0-3分为阴性(-),4-6分为弱阳性(+),7-9分为强阳性(++)。HIF-1a阳性分级标准:先按着色强度打分:无色0分,浅黄色1分,棕黄色2分,棕褐色3分;再按阳性细胞所占百分比打分,参考Zhong等的报道:无阳性细胞数为0分,阳性细胞数<1%为1分,1%-10%为2分,10%-50%为3分,>50%为4分;着色强度与阳性细胞百分比的乘积:0-3分为阴性(-),4-6分为弱阳性(+),7-9分为中度阳性(++),10-12分为强阳性(+++)。统计学处理采用SPSS13.0软件包,相关关系的分析采用Spearman等级相关分析法。结果一、Glut-1的表达结果Glut-1的阳性染色位细胞膜上出现棕黄色和棕褐色颗粒,其在胆管癌组织中有阳性表达(66.7%),而其在正常胆管组织中未有阳性表达。并且其表达与肿瘤分期、分化程度及有无淋巴结转移有关,而与肿瘤大小无关。二、HIF-1a的表达结果HIF-1a的阳性染色位细胞核内出现棕黄色和棕褐色颗粒,其在胆管癌组织中有阳性表达(73.3%),而其在正常胆管组织中未有阳性表达。并且其表达与肿瘤分期、分化程度及有无淋巴结转移有关,而与肿瘤大小无关。三、Glutl的表达与HIF-1a表达的关系Glutl和HIF-1a在胆管癌中表达呈正相关性(r=0.583,P<0.01)。结论胆管癌组织中Glut-1和HIF-1a呈现高表达,同时两者的表达成正相关。