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克伦特罗（Clenbuterol,CBL）、沙丁胺醇（Salbutamol,SAL）等β-兴奋剂由于对人体的毒副作用已被各国禁止在畜牧业使用。目前对其分析监控主要采用二步法:ELISA法筛选和GC-MS法确证相结合。ELISA法具有分析速度快、灵敏度高、样品处理简单等特点,特别适合大批量样品的快速筛选。 传统ELISA多以酶标板为载体,本文旨在以抗CBL、SAL抗体的制备为基础,建立磁性微粒为载体的CBL、SAL的免疫检测方法,并对磁性微粒和酶标板为载体的检测效果进行比较,以期开发新的固相载体材料用于β-兴奋剂检测。 以重氮化法将CBL分别和载体蛋白BSA、OVA偶联,以偶联物CBL-BSA免疫新西兰兔,所得抗血清先经饱和硫酸铵沉淀和DEAE-纤维素阴离子交换层析初步纯化,然后以金磁微粒为载体包被BSA,通过亲和吸附法进一步除去抗CBL多抗中针对载体蛋白BSA的抗体,得到纯度较高的针对CBL的抗体;以制备的抗体为基础,对CBL的间接竞争酶联免疫检测（IC-EtA）方法进行了初步研究,检测线性范围为1.5～121.5 ng/mL,IC50为22 ng/mL。 通过SAL与丁二酸酐的醇解反应制备SAL的琥珀酸衍生物,采用混合酸酐法分别将其和载体蛋白BSA、OVA偶联,以偶联物SAL-BSA免疫新西兰兔,所得抗血清中针对载体蛋白的抗体效价很低,故只经简单的饱和硫酸铵沉淀和DEAE-纤维素阴离子交换层析纯化,得到纯度较高的针对SAL的抗体。 以纯化的抗SAL多抗为基础,酶标板为载体建立SAL的IC-EIA方法,线性范围为0.5～10.0 ng/mL,IC50为5.29 ng/mL,抗SAL多抗和CBL有较明显的交叉反应,达39.6%,故可同时用于CBL的检测,检测线性范围为0.5～50 ng/mL,IC50为13.37 ng/mL。以购买的抗SAL单抗为基础,磁性微粒为载体建立SAL的“一步法”IC-EIA,检测时间2h,线性范围0.5～100 ng/mL,IC50为11.19 ng/mL,不同猪样品的平均添加回收率为84.3%～118.6%。与酶标板相比,磁性微粒为载体进行检测具有线性范围宽、时间短等优点。