Rho/ROCK通路对人U87胶质瘤细胞侵润转移能力调节作用的体外实验研究

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目的观察Rho/ROCK细胞信号通路对体外培养的U87胶质瘤细胞生长、迁徙及侵润转移能力的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养U87胶质瘤细胞,U87细胞经不同浓度(0、5、10、25、50、100μmol/L)的Y-27632作用不同时间(12h、24h、)后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Y-27632对U87细胞生长的影响。Transwell细胞运动、侵袭模型试验分别检测U87细胞经不同浓度(0、10、25、50μmol/L)的Y-27632处理12小时后的迁徙、侵袭能力的变化。应用Rho激酶活性检测试剂盒检测不同浓度的Y-27632对细胞中ROCK活性的影响。蛋白免疫印记法检测经不同浓度(0、10、25、50μmol/L)的Y-27632处理12小时后的U87细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平的变化。结果MTT实验表明不同浓度的Y-27632对U87细胞的生长增殖没有明显影响。Transwell细胞运动、侵袭模型实验结果显示随着Y-27632实验浓度的增加,U87细胞的运动、侵袭能力逐渐降低。Rho激酶活性检测结果显示随着Y-27632浓度的提高,U87细胞中ROCK活性逐渐抑制,在一定范围内呈浓度依赖性。蛋白免疫印记法检测表明随着Y-27632实验浓度的增加,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平逐渐降低,以MMP-2蛋白为著。结论体外实验结果表明,Rho/ROCK细胞信号通路的阻断能降低U87细胞的迁徙、侵袭能力,同时细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达减少。Rho/ROCK细胞信号通路与U87细胞的侵润转移密切相关。
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