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背景和目的缺血后处理(ischemic postconditioning, IPO)是指心肌缺血后,在接受长时间再灌注之前给予的一组反复、短暂的再灌注／缺血循环,这种处理可以明显减轻心肌再灌注损伤。研究证明,大鼠心脏左冠状动脉前降支(LAD)结扎造成缺血30 min,给予缺血／再灌注处理(10s/10 s)5个循环后处理,随后恢复冠脉血流,能使大鼠的心肌梗死面积较对照组明显减少。但是关于缺血后处理的研究大都集中在再灌注早期(再灌注3～6 h),在再灌注24 h缺血后处理是否具有心肌保护作用的相关研究较少。因此,本实验通过构建心肌缺血再灌注及缺血后处理大鼠模型,观察在再灌注24 h的心肌梗死面积以及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)分子的改变,旨在探讨缺血后处理心肌保护作用的时间窗及其相应的分子机制。方法选取体质量220-250 g的健康雄性Wistar大鼠126只,随机均分为7组,每组18只大鼠又根据再灌注时间不同分为两个小组(再灌注3 h、24 h；n=9)。①缺血再灌注组(I/R组)：左冠状动脉前降支(LAD)结扎缺血30 min,然后直接恢复再灌注；②缺血后处理组(IPO组)：30 min LAD缺血,持续性再灌注前给予5个循环的缺血／再灌注后处理(10 s/10 s)；③缺血后处理+1400W (iNOS抑制剂)组(IPO+1400W组)：缺血后处理前5 min给予大鼠尾静脉注射1400W(1 mg/kg)；④缺血再灌注+1400W组(I/R+1400W组)：直接恢复再灌注前5 min尾静脉给予大鼠1400W (1 mg/kg);⑤缺血后处理+LY294002 (PI3K阻断剂)组(IPO+LY294002组)：缺血后处理前5 min给予大鼠尾静脉注射LY294002(0.3mg/kg);⑥缺血再灌注+LY294002组(I/R+LY294002组)：直接恢复再灌注前5min尾静脉给予大鼠LY294002 (0.3 mg/kg);⑦假手术组(Sham):LAD只穿线,不结扎,其余手术步骤与其他组别大鼠一致。在再灌注3h和24 h,每组分别随机选取3只大鼠做心肌切片进行TTC染色,用于测量梗死面积。剩余的老鼠留取血清标本及组织标本,采用Elisa方法检测血清肌酸激酶(CK)活性,免疫组织化学染色法检测心肌组织p-Akt的蛋白表达水平,Western blot法检测p-Akt及iNOS的表达。采用SPSS 16.0软件对实验数据进行统计分析。结果1.心肌梗死面积测定：Sham组大鼠无明显心肌梗死。在再灌注3h和24 h,与I/R组相比,IPO组均显著减少了心肌梗死面积,组间差异均有统计学意义(p<0.05)；再灌注24 h与再灌注3h相比,I/R组和IPO组的梗死面积均增大。在再灌注24 h, iNOS抑制剂(1400W)和PI3K阻断剂(LY294002)均能阻断IPO保护心肌的作用,即：I/R组、IPO+1400W组、IPO+LY294112组梗死面积无显著组间差异(p>0.05)。2.血清CK的活性：缺血前,各组大鼠血清CK活性无明显差异。在再灌注24 h,缺血后处理显著降低CK活性,差异有统计学意义(P均<0.05)。但是,iNOS抑制剂1400W完全抑制了IPO的保护作用,即IPO+1400W组与I/R组CK活性的差异无统计学意义。3.缺血心肌组织p-Akt表达：假手术组中,p-Akt蛋白的表达量很低。在再灌注3 h, IPO组p-Akt的表达比I/R组p-Akt的表达高6倍(p<0.05),LY294002能够阻断后处理保护性激活Akt的作用；但是,在再灌注24 h, IPO组与I/R组p-Akt的表达无明显差异(p>0.05)。4.缺血心肌组织iNOS的表达：在再灌注24 h,与I/R组相比,IPO组iNOS的表达显著增高,组间差异有统计学意义(p<0.05); PI3K阻断剂LY294002能阻断后处理升高iNOS表达的作用。在再灌注3h, iNOS的表达组问无明显差异(p>0.05)。结论心肌缺血再灌注24 h, IPO仍具有心肌保护作用,这种保护作用与iNOS表达上调有关,而iNOS的上调由PI3K/Akt信号通路所介导。