冈村凹顶藻和9种软体动物的代谢产物分析

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海洋物种资源丰富,属于五个生物界、四十四个生物门,如此富饶的海洋物种资源为海洋天然产物的宝库。海洋天然产物广泛来源于微生物与浮游生物、苔藓虫类、海藻(褐藻、绿藻、红藻)、海绵、腔肠动物、软体动物、棘皮动物、被囊动物等。本文着眼于红藻和软体动物进行天然产物的探索。凹顶藻属(Laurencia)约135种,其中中国有37种,是属于红藻门、红藻纲、仙菜目、松节藻科的海藻,主要分布于热带、亚热带和温带海区的潮间带附近及深海部分。凹顶藻次级代谢产物数量众多,并且具有丰富的结构类型,主要包括倍半萜、二萜、三萜和C15-聚乙酰等,多半次级代谢产物含有卤素元素,其中一些凹顶藻次级代谢产物报道具有抗菌、细胞毒活性、拒食以及驱虫等多种生物活性。本文对凹顶藻以近年来代谢产物的研究进展进行了综述,归纳例举了部分具有新颖构造、有生物活性的化合物。本文中冈村凹顶藻(L.okamurai)样品采自中国广东湛江。将干燥并粉碎的冈村凹顶藻样品用甲醇、二氯甲烷等有机溶剂进行提取,粗提取物再用乙酸乙酯进行萃取。获得的乙酸乙酯相通过薄层层析、硅胶柱层析、凝胶柱层析(Sephadex LH-20)和半制备高效液相色谱(HPLC)等方法一步步分离提纯,最终得到单体化合物。然后运用1H NMR、13C NMR和质谱等现代波谱技术来鉴定化合物的结构。从广东湛江的冈村凹顶藻中共分离鉴定了2个化合物。软体动物门有着巨大生物多样性,其下分为八个不同的纲。软体动物为人类供应了丰富的资源,比如食品、贝壳、染料和药物。在世界上的很多文化中,软体动物很长时间以来是一个具有医疗效果的产物的来源。尽管有一些软体动物被壳,但大多数软体动物基本上都有柔软部分,且部分物种营滤食生活需大量接触含有细菌和微生物的海水,使其易于受到捕食者和病原体的侵害。然而,软体动物像所有无脊椎动物一样,没有获得性免疫。这表明软体动物必须发展替代防御策略,来保护自己免受微生物的侵袭。在自然选择的压力下,一系列具有不同的抗菌,抗真菌,抗寄生虫和抗病毒的次级代谢物在软体动物中发展。因而,对软体动物提取物和次级代谢产物的生物活性的研究兴趣越来越大。本文软体动物的样品是分别从日本的北海道、东北、关东、中国四国等地采集的日本蚬(Corbicula japonica)、北寄贝(Pseudocardium sachalinense)、虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)、太平洋褶柔鱼(Todarodes Pacificus)等。本文基于LC-MS/MS的分析数据比较分析了这9种软体动物的代谢产物。各样品称重后切成小块,使用Bligh/Dyer法或70%乙醇法进行抽提,粗提取物经减压浓缩、冷冻干燥后称重并调节浓度至10mg/ml备用。LC-MS/MS分析用样品浓度调整为0.05mg/ml。分析比较LC-MS/MS的数据得到日本蚬和虾夷扇贝与另外7种软体动物不同,含有较多分子量为549的特征化合物。经凝胶柱层析(Sephadex LH-20)、薄层层析和示差检测-高效液相色谱(RID-HPLC)等方法分离提纯该化合物,并利用1H NMR、13C NMR和LC-MS/MS等现代波谱技术鉴定该化合物为麦芽三糖与甲酸的结合体。即日本蚬和虾夷扇贝较其他软体动物来说含有大量的麦芽三糖。对于不同产地日本蚬的代谢产物分析得到,来自不同产地的日本蚬麦芽三糖的含量差异较大。推测麦芽三糖可作为日本蚬溯源和鉴定品质的标记化合物。对采集自日本函馆、五岛和广岛的太平洋褶柔鱼进行了代谢产物分析。产自不同产地的太平洋褶柔鱼其代谢产物组成成分大致相同,不同之处在于某些特殊化合物,如章鱼碱、242.1750/22.53(分子量/保留时间)和苯丙氨酸的含量。详细分析各样品代谢产物组成的数据也证实了这一点。基于LC-MS/MS的代谢产物分析法,能快速、有目的性的找到特征化合物,从而有针对性的进行分离提纯,在一定程度上给样品的化学成分的分析研究带来了便利。同时,分析比较不同产地的同种生物之间代谢产物组成和含量的差别,可建立产地溯源及品质鉴定的准确、快速的方法。
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