背景和目的 HCV 6a所致的慢性丙型肝炎在华南等地呈快速增长趋势,目前尚乏该地区的HCV分子流行病学研究。此外,中国人群,尤其是6a亚型及肝硬化人群,应用DAAs的有效性及安全性数据相当匮乏。同时,目前尚缺乏HCV 6a全基因细胞培养模型建立成功的报道。本课题旨在通过分析广州地区HCV分子流行特点,建立DAAs多中心队列、C-NS2/JFH1嵌合毒株、全长感染性克隆及亚基因组复制子等HCV 6a亚型的体外细胞培养模型来阐明华南高流行HCV 6a病毒株的分子流行病学特点、DAAs治疗现状,同时为疫苗研制、抗病毒药物的评价和筛选等提供分析平台。方法 1.PCR法扩增HCV的Core-E1片段,测序后基于分子钟法分析广东HCV的起源及推断传播时间。2.建立多中心的DAAs治疗CHC患者非肝硬化及肝硬化队列,分析两个队列患者的病毒学应答情况、肝硬化病情变化及安全性;模建HCV lb、3a及6a亚型domain I蛋白空间结构后行DCV与dimer的分子对接研究。3.以JFH-1为骨架,构建6a Core-NS2/JFH1、C-NS5B/JFH1感染性克隆及复制子系统,选择丙肝患者血清直接感染SF268细胞。结果1.1b（61.7%）和6a（20.2%）亚型是广州地区最常见的HCV基因亚型,其次为2a（6.1%）、3b（6.1%）和3a（5.2%）亚型。我国HCV 1b亚型在广州流行,并于20世纪70～80年代向全国各地播散;我国地区的6a亚型主要起源于越南。2.①非肝硬化队列:6家中心入组的226例患者中,总SVR12为96%（216/226）。3 型患者 SVR12 明显低于非 3 型患者（77%Vs.98%,P＜0.001）。②肝硬化队列:6家中心入组的198例患者中,总SVR12为96.5%（191/198）。治疗后患者肝脏FibroScan TE值、APRI及FIB-4值逐渐下降。此外,39例患者随访至治疗结束后第72周,MELD评分、失代偿肝硬化事件均较基线明显下降。③对于1b/6a来说,DCV的作用模式大概率的出现两类:一类是作用于AH的corner区域,即1mol蛋白能结合2mol达卡;另一类是作用于二聚体的界面。而DCV与3a的结合与1b和6a明显不同。3.构建了三株HCV 6a C-NS2/JFH1嵌合毒株,病毒复制均于转染后一个月内达高峰;构建了 C-NS5B/JFH1嵌合毒株,并引入“LSG”突变,建立了具备完整6a亚型ORF的中等复制水平（60%）的感染性克隆;经G418筛选获得了高效复制的6a亚基因组复制子。此外,发现HCV可一过性感染SF268并激活PI3K/AKT 通路。结论华南地区与输血传播相关的1b亚型呈逐渐减少趋势,而与吸毒和性接触传播相关的6a亚型呈增多态势。以SOF为基础的DAAs方案对于中国人群,无论有无肝硬化,均具有很好的抗病毒疗效及安全性;并发现发现1b和6a与DCV的作用模式不同于3a亚型,这可能是DCV治疗效果差异的分子机制。建立了中国HCV 6a细胞感染和复制子模型,为疫苗研制、抗病毒药物的评价和筛选等提供了分析平台。