为了进一步研究奶牛低酸度酒精阳性乳的发病原因和发病机制,在调查酒精阳性乳发病原因和本实验室已有试验的基础上,通过分析分析正常牛和患牛乳腺组织中热休克蛋白70(HSP70)基因表达量的差异和HSP70在乳腺中的定位,来研究阐明奶牛低酸度酒精阳性乳与应激的关系。热休克蛋白(HSPs)是一类存在于所有生物体细胞内比较保守的蛋白,在遇到外界刺激时,能诱导或增强其表达,以保护细胞免受损害。国内外许多研究证明热休克蛋白可以作为测定动物的应激状态的指标。本研究通过对患牛乳腺组织中热休克蛋白的免疫组织化学和分子生物学研究,从分子机理分子方面来阐明奶牛低酸度酒精阳性乳的发生原因,为奶牛低酸度酒精阳性乳的防治提供理论依据。试验一低酸度酒精阳性乳患牛乳腺组织中HSP70的免疫组织化学研究分别采集了低酸度究酒精阳性乳患牛和正常牛的乳腺组织,通过免疫组织化学检测奶牛乳腺组织中的HSP70进行分布定位,试验结果显示:HSP70在低酸度酒精阳性乳患牛乳腺组织中阳性染色更为明显,阳性信号主要分布于患牛乳腺腺泡的上皮细胞中,表明应激对乳腺腺泡的上皮细胞产生了影响,从而导致了阳性乳的发生。试验二HSP70mRNA在低酸度酒精阳性乳患牛和和正常牛乳腺中表达差异的研究分别从低酸度酒精阳性乳患牛和健康牛乳腺组织中提取总RNA,采用优化的半定量RT-PCR技术,以牛的β–actin为分子内参,比较研究了HSP70 mRNA在健康牛和低酸度酒精阳性乳患牛乳腺组织中的表达差异。结果表明:低酸度酒精阳性乳中HSP70 mRNA较高(0.805±0.05),正常牛的表达水平较低(0.334±0.04),且差异显著(P<0.05)。我们还得到奶牛HSP70 mRNA的部分序列,与GenBank中登录的奶牛的HSP70 mRNA(序列号为BtU09861)序列同源性高达100%。