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儿茶酚类铁载体是由非核糖体肽合成酶(NRPS)参与合成的一类低分子量高效铁螯合剂,在胃肠道中分布广泛,对微生物细胞的铁营养平衡具有重要作用;胃肠道微生物菌群分泌的胞外酶具有许多人体自身不具备的代谢功能,参与机体营养代谢的过程中对胃肠道的营养与健康发挥益生功效,因此,筛选符合益生菌特征且具有产酶活性的人消化道源儿茶酚类铁载体高产菌株,在食品、医药和工农业生产等领域具有重要的潜在应用价值。本研究以21株人胃肠道源微生物为研究对象,筛选NRPS功能基因片段腺嘌呤结构域(A domain),结合16S rRNA基因序列和NRPS A domain氨基酸序列分析,得到8株产儿茶酚类铁载体菌株,分别命名为Escherichia coli Gut 01、Bacillus sp.Gut 03、Escherichia coli Gut 07、Escherichia coli Gut 12、Escherichia coli Gut 13、Bacillus sp.Gut 14、Bacillu cereus Gut 16和Escherichia coli Gut 20,经NRPS合成的次级代谢产物分属于肠杆菌素(Enterobactin)和芽孢杆菌素(Bacillibactin)。利用Rioux法测定儿茶酚类铁载体产量,其产铁载体能力具有显著差异,菌株B.cereus Gut 16产芽胞杆菌素的能力最强(94.75±0.40μM),菌株E.coli Gut 07产肠杆菌素的能力最强(66.48±0.10μM)。以儿茶酚类铁载体产量较高的四株菌为研究对象,分析其产酶活性,四株高产菌株都有淀粉酶、纤维素酶和β-葡萄糖苷酶活性,除B.cereus Gut 16以外都有乳糖酶和植酸酶活性,B.cereus Gut 16和E.coli Gut 20具有脂肪酶活性,仅B.cereus Gut 16具有蛋白酶活性。利用体外模拟胃肠道环境连续培养法测定四株菌株的存活率,结果表明其具有较强的耐酸耐胆盐能力,在模拟胃部培养6 h的存活率大于60%,在模拟肠道培养24 h的存活率为102.84%114.70%。通过测定四株高产菌株的自凝集率、黏蛋白粘附率和表面疏水率,结果表明其具有较强的肠道粘附定植能力:在20 h的自凝集率介于30%40%之间;黏蛋白粘附率介于26.20%56.67%之间;对二甲苯、三氯甲烷和乙酸乙酯三种有机溶剂的表面疏水率分别为5.72%57.68%、31.65%46.78%、21.79%55.18%。四株高产菌株的抗生素耐受性研究发现,E.coli Gut 07、E.coli Gut 12和E.coli Gut 20对青霉素、苯甲异恶唑青霉素、四环素、多西环素和红霉素具有耐受性,对其它15种测试抗生素均没有耐受性;B.cereus Gut 16对羧苄青霉素、丁胺卡那霉素、四环素和红霉素具有耐受性,对其它16种抗生素没有耐受性。小鼠经口急性毒性实验结果显示,四株菌株的半数致死量(LD50)和小鼠最大耐受剂量(MTD)均大于9.0×1012 CFU/kg体重(bw),各组小鼠均未出现腹泻、中毒和死亡病例,四株菌株在浓度不大于4.5×1011 CFU/mL,灌胃剂量为20 mL/(kg bw)时对小鼠无急性毒性,无菌株移位现象,可以作为潜在益生菌对其进行应用研究。胃肠道微生物菌群具有庞大的微生物资源和基因资源,是挖掘新型天然产物和潜在益生菌的重要来源。本研究得到四株符合益生菌特征且具有多重产酶活性的人消化道源儿茶酚类铁载体高产菌株,为儿茶酚类铁载体产生菌的应用及其在胃肠道营养与健康中发挥功能作用的研究奠定基础。