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猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)是一种可引起猪严重腹泻的猪肠道疾病,属于Ⅰ类冠状病毒。其发病主要特征是急性水样下痢、脱水和呕吐等症状,仔猪感染该病毒后具有很高的死亡率,并给养猪行业带来了巨大的经济损失。近几年来,随着分子生物学技术的飞速发展,人们对PEDV的基因结构、基因功能及致病分子机理,甚至对该病毒的检测以及预防疫苗等方面都有比较大的突破。虽然有了非常更深入的认识,但是对于全面控制PEDV的流行仍处在初步的研究阶段。本论文的研究内容及结果如下:1.本试验利用生物学软件和在线数据库中筛选出PEDV S2基因的B细胞表位,并通过Overlap PCR方法将其嵌入到嗜酸乳杆菌的S-层蛋白基因中,获得融合基因SLP-EpitopeS2。然后将融合基因SLP-EpitopeS2导入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建出了原核表达载体pGEX-SLP-EpitopeS2。2.通过PCR扩增、双酶切及基因测序结果证明融合表达载体pGEX-SLP-EpitopeS2的正确性。SDS-PAGE结果证明融合蛋白SLP-EpitopeS2的分子量为77 kDa,其中GST标签蛋白分子量大小为26 KDa,与理论值 ’致;Western blot结果证明融合蛋白SLP-EpitopeS2的正确性,能被GST血清所识别,且B细胞表位基因分别能被表位特异的鼠源单克隆抗体(McAb)和表位合成多肽所识别。3.通过切胶纯化的方法成功纯化出嵌入型蛋白GST-SLP-EpitopeS2,并免疫接种6周龄BALB/c小鼠,以GST标签蛋白与PBS作为对照组。将各组小鼠的总IgG、IgG1、IgG2a的水平,应用间接ELISA方法进行检测。试验结果表明:经第三次免疫后的血清IgG水平显著高于前两次;实验组的IgG水平极显著高于GST标签蛋白组和PBS免疫组(P<0.01)。小鼠的IgG亚型 IgG2a和 IgG11水平的检测结果显示,嵌入型蛋白 GST-SLP-EpitopeS2免疫组的IgG2a和IgG1水平均显著的高于GST标签蛋白组和PBS免疫组(P<0.01);嵌入型蛋白GST-SLP-EpitopeS2免疫组IgG1水平显著高于IgG2a(P<0.05),该结果提示嵌入型蛋白GST-SLP-EpitopeS2可能更倾向于激发体液免疫应答。本试验的结果进一步对PEDV S2基因的B细胞表位嵌入型蛋白SLP-EpitopeS2的抗原性和免疫保护性试验研究奠定了基础。