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大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位(LTB)是迄今为止已知的最有前途的粘膜免疫佐剂之一,可辅佐外来抗原产生有效的粘膜和系统免疫.同时,LTB又有显著的免疫调节活性,因此近年来有关LTB的高效制备、免疫生物学以及粘膜佐剂应用的研究颇受关注.人乳头瘤病毒(HPV)是能引起人类皮肤粘膜增生性病变的一类DNA肿瘤病毒,其中某些高危型(包括HPV16和HPV18)是人类绝大部分(80％)子宫颈癌的重要启动因子.子宫颈癌主要危害经济不发达落后地区的广大妇女,中国每年死于子宫颈癌的妇女总数约占全世界因子宫颈癌死亡者的几近半数,因此在中国进行预防性HPV16疫苗研究具有重大的意义.HPV16主要引起尿生殖区感染,主要侵袭人体的肛—生殖道粘膜.因此,理想的预防性HPV16疫苗必须能在粘膜部位激发高水平的保护性抗体.众所周知,通常,抗原经粘膜途径进入机体不能激发有效的免疫反应,相反,往往引起免疫耐受,必须辅以适当的粘膜佐剂始能克服.所以,开发有效的粘膜佐剂,对研制预防性HPV16疫苗已是当务之急.目的:(1)建立一套高效表达、纯化重组大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位(rLTB)的方法,并对其免疫学活性进行研究.(2)研究rLTB在HPV16 DNA疫苗中的佐剂效应,为制备可明显增强阴道粘膜免疫的新型HPV预防性疫苗奠定基础.结论:(1)通过对rLTB蛋白表达和纯化过程的优化,建立了一套简便、高效、易行的制备rLTB蛋白的方法.该方法的建立为大规模制备rLTB蛋白奠定了基础.(2)证实了该方法制备的rLTB蛋白一方面具有粘膜佐剂活性,经鼻粘膜免疫后,可显著增强机体对共免疫抗原的系统和粘膜反应;另一方面,rLTB蛋白在体外具有免疫抑制作用.rLTB蛋白的这两种免疫学作用将为其应用于新型粘膜疫苗的研制及修饰异常免疫反应提供依掘.(3)首次利用LTB蛋白作为HPV16 DNA疫苗的佐剂,并对不同免疫途径的免疫效果进行了分析.证实LTB对于HPV16L1 DNA疫苗的佐剂效应与其免疫的途径有关.经肌肉注射免疫,LTB可增强其系统体液免疫应答,但对细胞免疫则无增强作用,也不能产生有效的粘膜免疫,而且证实了LTB可使免疫反应向Th2型极化.(4)证实经鼻滴入和口服免疫,LTB可增强HPV16L1 DNA疫苗的体液和细胞免疫,而且可刺激机体粘膜淋巴组织分泌HPV16L1特异性IgA,从而产生有效的粘膜免疫应答,这将有助于对HPV16这种以性传播为主要感染途径的疾病的预防,将为开发有效预防HPV16感染、子宫颈癌及相关肿瘤的疫苗奠定基础.