背景和目的:病态窦房结综合征是临床常见疾病,对人类健康危害很大,有关其发病机制及防治措施的研究一直是心血管病研究领域的重要内容之一。本实验室在前期的研究中发现,缺血/再灌注（I/R）可引起在体及离体窦房结细胞结构和功能的改变,影响其电信号发放的节律和频率,导致电生理活动的紊乱。而心肌缺血预适应（IP）是迄今发现的最强大的机体内源性保护机制,普遍存在于正常动物及人的不同组织和器官,能有效对抗缺血及再灌注损伤所造成的多种心肌损害。但IP 的信号转导途径非常复杂,IP 的保护机制至今尚未阐明,有关IP 对窦房结的影响研究也十分有限。近期研究显示,KATP通道开放在IP 中具有重要作用,但不同类型KATP通道开放后的相关效应及其对IP 信号转导的影响仍存在诸多争议。细胞骨架也因其对信号转导的重要调节作用而逐渐被IP 研究所关注。研究表明,细胞骨架不仅调节着心肌细胞的电、机械活动,而且骨架结构的完整性对IP 效应的产生也具有重要影响。本研究将利用离体培养的乳鼠窦房结细胞,观察模拟IP 对细胞活性、离子稳态、骨架结构及离子通道的影响,探讨模拟IP 对乳鼠窦房结细胞的保护作用及机制;观察线粒体KATP通道在IP 中的作用,探讨KATP通道开放在IP 信号转导中的作用环节;观察细胞骨架结构改变对IP 效应的影响,探讨维持骨架结构完整性在IP 中的作用意义。为防治窦房结I/R 损伤提供理论依据和实验证据。方法: 1.以Ⅱ型胶原酶为主消化分离乳鼠窦房结细胞,配合差速贴壁及Brdu 纯化培养。2.在原有模拟I/R 模型的基础上,通过四唑盐（MTT）比色及碘化丙啶（PI）染色检测细胞活性,选择最佳预适应方案,建立有效的模拟IP 模型。3.以免疫荧光法标记F-actin、β-tubulin 、desmin、vinculin 等骨架蛋白,通过激光共聚焦显微镜检测模拟I/R 及模拟IP 后乳鼠窦房结细胞骨架蛋白荧光分布及荧光强度的变化,分析模拟IP 对乳鼠窦房结细胞骨架结构的影响。4.以Ca²⁺荧光探针负载细胞内Ca²⁺,通过激光共聚焦显微镜定量分析模拟I/R 及模拟IP 后鼠窦房结细胞内Ca²⁺荧光强度的变化,探讨模拟IP 对乳鼠窦房结细胞Ca2+