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目的:研究光甘草定(Glabridin,GLD)对真菌性角膜炎的抑菌、抗炎作用及其潜在机制。方法:1.将烟曲霉菌分生孢子接种于96孔板中,给予GLD处理后测定药物的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC),并检测GLD对烟曲霉菌生物膜形成能力的影响。2.使用不同浓度GLD处理人角膜上皮细胞(Human corneal epithelial cells,HCECs)24小时,采用CCK-8试剂盒检测GLD对人角膜上皮细胞的毒性;烟曲霉菌分生孢子感染HCECs,采用革兰氏染色剂染色评估GLD对孢子粘附能力的影响。3.建立C57BL/6(B6)小鼠真菌性角膜炎模型,并在感染后开始给予GLD(药物治疗组)或DMSO(溶剂对照组)治疗,通过临床评分法评估感染后1天、3天、5天不同处理组小鼠角膜炎症的程度,并通过平板计数实验计算感染后5天小鼠角膜真菌菌落的数量。4.建立C57BL/6(B6)小鼠真菌性角膜炎模型,取感染后3天小鼠角膜,通过髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)测定、流式细胞术以及免疫荧光染色(Immunofluorescence staining,IFS)检测不同处理组之间中性粒细胞活性、浸润程度。5.取感染后1天、3天、5天小鼠角膜,采用聚合酶链式反应(PCR)检测各处理组小鼠角膜模式识别受体TLR4、Dectin-1 m RNA的表达,采用蛋白印迹法(Western blot)检测感染后3天、5天TLR4、Dectin-1蛋白水平的表达。6.采用PCR和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测下游炎症因子HMGB1、IL-1β、TNF-αm RNA及蛋白的表达。结果:1.在体外实验中,GLD浓度在8μg/m L时显著抑制了烟曲霉菌的生长,在12μg/m L可以抑制90%(MIC90),在16μg/m L抑制了99%(MIC99);而12μg/m L及以上浓度的GLD可以显著抑制烟曲霉菌生物膜的形成。2.通过CCK-8实验,16μg/m L及以下浓度的GLD不会对HCECs产生毒性,因此本研究选用16μg/m L的GLD进行接下来的实验;在HCECs中,与DMSO对照组相比,GLD处理组可以明显减少烟曲霉菌孢子的粘附作用。3.小鼠烟曲霉菌感染后,GLD治疗减轻了小鼠角膜严重程度,使临床评分降低;平板计数实验表明,与对照组相比,GLD治疗组使感染后5天角膜内的真菌菌落数量显著减少。4.通过流式细胞术、免疫荧光染色、MPO实验发现,与DMSO组相比,经GLD治疗后的角膜中性粒细胞浸润显著减少,中性粒细胞染色强度明显减弱,且MPO活性降低。5.给予小鼠GLD治疗,可抑制烟曲霉菌感染诱导的TLR4和Dectin-1 m RNA水平及蛋白水平升高。6.经GLD治疗后显著降低了C57BL/6小鼠角膜中炎症因子IL-1β、TNF-a和HMGB1的m RNA及蛋白表达。结论:1.GLD抑制了烟曲霉菌的生长,生物膜形成能力,并可减轻孢子对HCECs的粘附作用。2.小鼠角膜感染烟曲霉菌后,GLD治疗不仅改善了角膜炎症的严重程度,使角膜中的烟曲霉菌数量减少,还抑制了角膜中性粒细胞浸润。3.GLD可通过抑制TLR4,Dectin-1和促炎性介质如HMGB1、IL-1β和TNF-α的表达在烟曲霉菌角膜炎中发挥抗炎作用。