子痫前期是一种严重的妊娠特有疾病,是引起孕妇和围生儿死亡的主要原因之一。目前关于子痫前期的病因仍不明,与多器官血管痉挛、血管病理性损害和凝血系统激活相关。正常妊娠时存在着生理性的高凝状态,各种凝血因子及纤维蛋白原也较非孕妇女增加,使正常孕妇机体止血功能保持动态平衡状态。子痫前期时,血管内皮细胞受损,凝血因子及血小板激活,使机体凝血与抗凝血平衡失调呈明显的血栓倾向。迄今为止,建立了许多动物模型,但尚没有一个动物模型能较全面反映人类子痫前期的特点。2005年,Omatsu等建立了一种新的子痫前期动物模型,将能够提供凝血因子酶促反应表面的磷脂酰丝氨酸注射入妊娠ICR小鼠体内,最终引起了孕鼠高血压、蛋白尿,血浆抗凝血酶活性降低,胎盘绒毛间隙广泛纤维蛋白沉积,胎仔生长受限,而孕鼠其他器官如肺、肾、肝则未未能发现明显的纤维蛋白沉积,提示胎盘高凝状态血栓形成能引起孕鼠子痫前期样改变。模型的建立为从止血功能角度探讨子痫前期病机,以及纠正止血功能紊乱防治子痫前期提供例理论依据。已有报道,临床应用肝素、小分子肝素、阿司匹林抗凝,预防、治疗子痫前期,特别是发病早、病情重或多次复发者,可使部分患者获益。但是但其结论尚存在争议,且母胎安全性评价不足,应用时机和剂量选择尚无证据,使其临床使用带来了障碍。丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根,是化学成分研究进行比较深入的一种中草药。以丹参水溶性组分丹参素(Danshensu)为主丹参注射液在临床产科应用的安全性良好,且丹参素抗血栓形成作用已得到体内外试验证实。近年来,我国学者对丹参素的药理作用进行了许多研究,证明其具有保护心肌缺血、降血脂及抗动脉粥样硬化、抗炎及增强机体免疫、保肝、抗肿瘤等多种药理活性。祖国医学认为子痫前期为本虚标实症,其病机以“血瘀”为中心,这使利用丹参素的抗血栓效应预防、治疗止血功能障碍为发病机制的子痫前期成为可能。在本研究第一部分中,我们成功重复了Omatsu等建立的以胎盘广泛性纤维蛋白沉积和微血栓形成为特征的子痫前期动物模型。清洁级ICR小鼠按雌雄1:1夜间合笼,次日晨见到阴道栓定为妊娠第0.5天。将能够提供凝血因子酶促反应表面的磷脂酰丝氨酸(PS)在胎盘形成早期(妊娠第5.5天)连续从尾静脉注射到妊娠小鼠体内至妊娠第16.5天。分别测定孕鼠血压(无创鼠尾血压测定法)、尿蛋白(12小时尿蛋白浓度测定)、血小板计数、血浆ATⅢ含量(免疫比浊法)、血浆D-D含量(免疫沉淀夹心法)、凝血酶时间;仔鼠体重、鼻臀长、体重指数(PI)和胎盘重量;胎盘纤维蛋白PTAH染色、血栓调节素(TM)免疫组化染色;胎盘、肝、肾、尾HE染色。模型孕鼠表现出高血压、蛋白尿、FGR、死胎、血小板含量降低、血浆ATⅢ含量降低、D-D含量升高、胎盘绒毛间隙广泛纤维蛋白沉积及微血栓形成,而孕鼠其它器官如肝肾则未能发现明显的器质性改变,类似人类子痫前期的表现。本试验中子痫前期孕鼠的血浆ATⅢ含量降低、血小板计数降低及TT缩短,提示体内血小板活化,凝血系统激活:而D-D含量升高,提示血管内血栓的形成和继发性纤溶激活,与人类重度子痫前期表现相似。胎盘组织广泛纤维蛋白沉积和微血栓形成,以及TM强阳性表达证实局部凝血及抗凝激活状态,而其他脏器如肝肾未出现器质性改变,其表明妊娠早期胎盘循环中增强的高凝状态血栓形成倾向可能是子痫前期和FGR的发病机理之一和重要病理生理学过程。第二部分我们在第一部分建立的动物模型基础上,排除体内多因素影响前提下,探讨了肝素和阿司匹林在抗凝治疗的有效性,并对比了中药丹参水溶液中的重要组分丹参素在抗凝治疗中的作用。66只孕鼠随机分为对照组(Control group,C组)15只,模型组(Pre-eclampsia group,PE组)12只,肝素组(Heparin groupH组)9只,阿司匹林组(Aspirin group,A组)10只,低剂量丹参素组(Low-dosage Danshensugroup,L-D组)10只,高剂量丹参素组(High-dosage Danshensu group,H-D组)10只。自妊娠第5.5天始,对照组雌鼠尾静脉给予生理盐水,而其余实验组雌鼠尾静脉给予PS/PC微团液,每日一次,每次注射量为100μl,持续至妊娠第16.5天(共计给液12天)。自妊娠第6.5天始,H组、A组、L-D组和H-D组每日同时予普通肝素1IU,赖氨匹林20μg/g,低剂量丹参素(10μg/g)和高剂量丹参素(30μg/g)加入上述药液中,静脉给药,每日一次,持续至妊娠第16.5天(共计给药11天)。结果发现肝素对于子痫前期母体综合征—高血压和蛋白尿效果明显。不同剂量丹参素具有一定疗效,高剂量丹参素和阿司匹林对降低孕鼠血压较低剂量丹参素有效,药物干预后血压更接近正常孕期水平;高剂量丹参素对减少孕鼠尿蛋白较阿司匹林和低剂量丹参素有效,药物干预后尿蛋白更接近正常孕期水平。可见高剂量丹参素较低剂量丹参素对于母体临床综合征的改善更为显著,但总体较肝素作用为弱。进一步分析各剂量丹参素对于血浆止血功能的作用,发现高、低剂量丹参素均可显著提高血浆ATⅢ含量,作用强度同阿司匹林,弱于肝素;高剂量丹参素较低剂量丹参素对于血小板计数增加作用更为显著,强于阿司匹林;低剂量丹参素对于降低D-D作用明显,相当于肝素治疗水平,强于高剂量丹参素和阿司匹林;高、低剂量丹参素均能明显缩短TT至正常孕期水平,相当于肝素治疗水平;不同抗凝药物对于胎盘组织中纤维蛋白沉积均有显著改善作用,但高剂量丹参素和肝素干预后胎盘迷路层中血管TM表达较低剂量丹参素和阿司匹林降低;高剂量丹参素的总体抗凝效果仍不如肝素作用全面。本研究中发现,尽管肝素和阿司匹林均为小剂量,但长期使用可增加出血的风险,表现出各组一例胎盘早剥及肝素组肠管出血的风险。丹参素使用并未观察到明显副作用。第三部分我们继续在第一、二部分建立的动物模型及试验分组基础上,进一步丹参素对于子痫前期者仔代发育(胎儿综合征)影响。每组测量孕鼠体重增长;仔鼠体重、鼻臀长、体重指数(PI)和胎盘重量;每窝随机选取2只胎仔取脑称量,并行HE染色和尼氏(Nissle)染色。研究结果发现孕鼠体重增长下降;低妊娠率(仔鼠数减少),高死胎、吸收胎率;胎盘重量减少、仔鼠体重下降、唇臀长减少、体重指数不变;仔鼠脑重下降,大脑神经元细胞数减少,Nissle小体数减少。仔鼠总体表现为匀称性FGR,脑发育障碍。本部分继续对比研究了肝素、阿司匹林和不同剂量丹参素对于模型仔鼠FGR的疗效。结果发现各治疗组对于FGR者体重和身长的增长均有良好的改善作用;肝素对于FGR者各方面指标的改善作用均明显;高剂量丹参素对于FGR者母体体重增加、仔鼠鼻臀长、仔鼠脑重等指标的改善优势相对明显,总体作用接近肝素疗效;低剂量丹参素对于FGR者存活仔鼠数这一指标作用显著,其他方面的改善效果不如高剂量丹参素组;高低剂量丹参素对于仔鼠脑发育改善作用明显,明显优于阿司匹林组。我们认为该动物模型能较全面的模拟了子痫前期,特别是重度子痫前期的临床症候群(母体综合征和胎儿综合征),且应证了止血功能失调的病机学假说,同时为该疾病的临床诊治提供了新的研究思路。高、低剂量丹参素对子痫前期模型小鼠的母体综合征(高血压、蛋白尿、止血功能异常)有显著改善作用,但作用弱于肝素,高剂量丹参素作用强于低剂量丹参素,低剂量丹参素作用与阿司匹林作用相当。高、低剂量丹参素对子痫前期模型小鼠的胎儿综合征(FGR、死胎、吸收胎)有显著改善作用,高剂量丹参素作用与肝素作用相当,低剂量丹参素作用相对较弱,而阿司匹林作用不显著。丹参素治疗子痫前期的优势还在于对于仔鼠脑发育障碍具有很好的改善作用,且临床使用具有较高的安全性和有效性。尽管由于用药时间短,样本量相对较小,试验结果有一定的局限性,但本试验为探索丹参素治疗子痫前期提供了一定的理论依据。