论文部分内容阅读
表皮细胞生长因子（epidermal growth factor,EGF）是一种能够促进细胞增殖、分化的小分子多肽,在动物机体内一系列的生理过程中扮演重要的角色。人们在研究哺乳动物的EGF时发现其可影响动物的生长性能、免疫功能及肠道发育,但是目前有关鸡表皮生长因子（gallus epidermal growth factor,gEGF）的研究却很少有提及,而雏鸡抵抗力较弱,其生长发育易受到不良条件的影响,因此本试验拟采用乳酸乳球菌非抗性筛选表达系统进行外源表达gEGF,并通过体内外试验对其生物学功能进行初步研究。以下是研究内容及结果。人工合成SPusp45和gEGF融合基因片段,将此目的基因克隆至表达载体pNZ8149,之后电转化至乳酸乳球菌NZ3900,获得了能够分泌表达gEGF的工程菌LL-pNZ8149-gEGF,重组工程菌经Nisin诱导后,利用Western blot和SDS-PAGE检测到菌体和上清中表达的蛋白,此外,还利用HisTrap柱成功从上清中纯化出gEGF蛋白。体外培养鸡胚成纤维细胞UMNSAH/DF-1至单层细胞的60%左右后饥饿培养12 h,之后以不同浓度的gEGF蛋白溶液分别刺激UMNSAH/DF-1细胞,观察gEGF对UMNSAH/DF-1细胞的增殖活性的影响。结果发现,1-10μg/mL gEGF均可显著促进UMNSAH/DF-1细胞的增殖,5μg/mL gEGF的促进作用最强。以5 d龄雏鸡作为试验动物,将其分为3组,每组每日分别灌服1ml M17培养基、LL-pNZ8149诱导上清液、LL-pNZ8149-gEGF诱导上清液,连续灌服2周,记录每天的采食量、体重,计算1周及2周内平均日采食量、平均日增重以及料肉比,以此作为评价gEGF对肉鸡生长性能影响的依据,结果发现:gEGF可显著提高肉鸡末重、平均日增重、平均日采食量以及2周内的料肉比;2周后处死鸡群,取出免疫器官脾脏、胸腺、法氏囊,计算免疫器官指数,翅静脉采血检测血清IgG、IgA水平,之后分别刮取十二指肠、空肠、回肠黏膜测定黏膜sIgA水平,以此作为评价gEGF对肉鸡免疫功能影响的依据,结果发现:gEGF可显著提高胸腺、脾脏指数以及血清IgG、IgA以及十二指肠黏膜sIgA水平;此外,2周后分别取十二指肠、空肠、回肠组织制作组织切片,分析各肠段绒毛高度,隐窝深度的变化,以此作为评价gEGF对肉鸡肠道发育影响的依据,结果发现:gEGF可显著提高十二指肠,空肠绒毛高度,降低十二指肠隐窝深度。本试验成功实现了gEGF在乳酸乳球菌非抗性筛选表达系统的表达,所表达的产物具有促进UMNSAH/DF-1细胞增殖的活性,动物实验表明,gEGF具有改善肉鸡的生长性能,提高免疫功能以及促进肠道发育的作用。