论文部分内容阅读
肝脏是人体重要的器官,具有生成激素、转化内源和外源性物质、解毒等作用。随着环境污染的加剧,大量有害物质危害着肝脏的健康。外源性肝毒性物质对肝脏的毒害作用表现在能够产生大量自由基,导致肝脏脂质过氧化,使肝细胞大量坏死。乐赛普颗粒剂由菊花提取物、葡萄籽提取物和枸杞多糖提取物等组成。菊花是菊科植物菊Chrysanthemum morifoLium Ramat.的干燥头状花序,在我国用途比较广泛,使用历史悠久,有食用菊和药用菊之分,菊花中含有黄酮、三萜类等化学成分,《神农本草经》中将菊花列为上品,久服无副作用。研究表明,菊花中的黄酮类等物质具有很强的抗氧化能力。枸杞子为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实,含有枸杞多糖等多种成分,枸杞多糖具有对抗实验动物肝损伤的作用。葡萄籽为葡萄科葡萄属葡萄Vitis viniferaL的种子,其主要成分为原花青素,原花青素中的低聚花青素具有很强的抗氧化活性。本课题制备了乐赛普颗粒剂,建立了颗粒剂的质量标准,并研究了其对小鼠四氯化碳和酒精性急性肝损伤的保护作用。一、正交设计法优化乐赛普颗粒的制备工艺,并建立质量标准。实验结果表明当主药为3.6 g,糊精用量5.4 g,乙醇体积2.0 mL,乙醇浓度90%时,颗粒剂收率较高,确定为其最佳制备工艺。二、制定了颗粒剂的质量标准,并对乐赛普颗粒剂进行质量评价。乐赛普颗粒剂的粒度、溶化性、水分、装量差异均符合相关规定,制定了可见分光光度法测定制剂中原花青素和总多糖的含量,方法可靠,使用方便,原花青素的含量为83.78-85.63 mg/g,总多糖含量在99.53-105.19 mg/g。三、建立四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型,将80只雄性小鼠分为8组,分别为正常组、模型组、阳性组、乐赛普低剂量组、乐赛普高剂量组、菊花组、枸杞组和葡萄籽组,正常组和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠,阳性组给予联苯双酯200 mg/kg,乐赛普低剂量给予600 mg/kg主药,乐赛普高剂量组给予1200 mg/kg主药,菊花组给予400 mg/kg菊花提取物,枸杞组给予400 mg/kg枸杞多糖提取物,葡萄籽组给予400 mg/kg葡萄籽提取物,连续灌胃给药9 d。第7 d给药后1 h,除正常组小鼠外,其余各组小鼠皮下注射5%CCl4（橄榄油稀释）0.1 mL/10 g,第8 d继续给药,第8 d晚上8点禁食12 h后,第9 d解剖前1 h各给药组再给药一次,小鼠摘眼球取血,血液4℃放置4 h后,4000 r/min,离心15 min,取血清,测定AST和ALT含量;解剖取肝脏,冷生理盐水漂洗干净后,称量肝脏重量,计算肝指数。取肝左叶,置于4%多聚甲醛溶液中,做肝组织病理学观察。剩余肝组织置于-80℃条件下用于肝组织匀浆。测定肝匀浆中SOD、MDA、GSH、GSH-Px、TG含量。实验结果表明相比于模型组,阳性组、乐赛普低剂量组和乐赛普高剂量组均能降低肝指数、AST、ALT的含量（P<0.01或P<0.05）;相比于正常组,模型组SOD、GSH、GSH-Px含量显著降低（P<0.01）,MDA和TG含量显著升高（P<0.01）;相比于模型组,阳性药组、乐赛普高剂量组SOD、GSH、GSH-Px含量显著升高（P<0.01或P<0.05）,乐赛普高剂量组和阳性组MDA和TG含量显著降低（P<0.01或P<0.05）,乐赛普低剂量组MDA含量显著降低（P<0.01）,葡萄籽组GSH含量显著降低（P<0.01）。阳性药组、乐赛普低剂量组和乐赛普高剂量组均能不同程度改善肝组织病理学状况。四、建立酒精致小鼠急性肝损伤模型,将80只雄性小鼠分为8组,分别为正常组、模型组、阳性组、乐赛普低剂量组、乐赛普高剂量组、菊花组、枸杞组和葡萄籽组,正常组和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠,阳性组给予联苯双酯200 mg/kg,乐赛普低剂量给予600 mg/kg主药,乐赛普高剂量组给予1200 mg/kg主药,菊花组给予400 mg/k g菊花提取物,枸杞组给予400 mg/kg枸杞多糖提取物,葡萄籽组给予400 mg/kg葡萄籽提取物,连续灌胃给药7 d。末次给药后1 h,除正常组小鼠外,其余各组小鼠一次性给予12 mL/kg50%乙醇。隔夜禁食12 h后,小鼠摘眼球取血,血液4℃放置4 h后,4000 r/min,离心15 min,取血清,测定AST和ALT含量;解剖取肝脏,冷生理盐水漂洗干净后,称量肝脏重量,计算肝指数。取肝左叶,置于4%多聚甲醛溶液中,做肝组织病理学观察。剩余肝组织置于-80℃条件下用于肝组织匀浆。测定肝匀浆中SOD、MDA、GSH、GSH-Px、TG含量。相比于正常组,各组肝指数无显著性差异（P>0.05）;相比于正常组,模型组SOD、GSH、GSH-Px含量显著降低（P<0.01）,AST、ALT、MDA和TG含量显著升高（P<0.01）;相比于模型组,阳性组与乐赛普高剂量组AST、ALT、MDA、TG含量显著降低（P<0.01或P<0.05）;相比于模型组,乐赛普高剂量组SOD、GSH、GSH-Px含量显著升高（P<0.01或P<0.05）。阳性组、乐赛普低剂量组、乐赛普高剂量组能够不同程度改善肝组织病理学状况。乐赛普颗粒剂制备工艺优化后,收率较高,外观形状好,符合相关规定,含量测定方法可靠。乐赛普对于酒精和四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤都具有很显著的保护作用,其作用机制与清除自由基,抑制脂质过氧化反应,稳定肝细胞形态,稳定细胞膜结构有关。