弓形虫病(Toxoplasmosis)是刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的一种人畜共患病。该病广泛分布于世界各地，人群及动物普遍易感。本虫由Nicolle和Manceaux于1908年发现，世界首例病人报道于1920年。解放前我国无弓形虫病报告。1955年，于恩庶首先在福建从兔及猫体内分离出弓形虫，1964年谢天华首次报告人弓形虫病例，1979年徐秉锟报告1例弓形虫病，并自其体内分离出弓形虫。目前，全球约有5～10亿人感染弓形虫。其感染的多寡，与该地区居民弓形虫感染的危险程度有关。在我国文献报告的弓形虫病尚很少，不超过150例。而实际存在的、潜在的、分散在各地临床内、外、妇、儿、眼、产、神经等科未能被发现的弓形虫病病例数估计至少有39万。该虫可垂直传播，可致死产、自发性流产，甚至引起胎儿脑缺损或重度精神发育迟滞等严重后果，同时也成为艾滋病等免疫缺陷病患者的重要致死原因之一。本研究主要目的是制备出抗弓形虫特异单克隆抗体(McAb)；制备出用途广泛、络合蛋白量大、性能稳定的磁粉球并应用于弓形虫抗体纯化和血清抗原浓缩；摸索出单一多抗ELISA和ABC-ELISA检测弓形虫特异循环抗原(CAg)和应用PCR技术检测其特异性核酸的最佳条件，进行流行病学调查和对孕产妇、精神病患者检测，为科学制定防治规划提供依据。方法常规方法制备出抗弓形虫特异McAb。应用聚合法研制磁粉球，将磁粉、苯乙烯、甲苯、反丁烯二酸、对二甲苯搅拌混匀后，置分散液中，在催化剂作用下，于80-90℃温度下高速搅拌、洗涤、分离。将弓形虫抗原(或单抗)加入磁粉球PBS混合液，在碳二亚胺作用下，4℃放置48h形成致敏磁粉球。将待提纯弓形虫抗体(抗原)加入致敏磁粉球中，37℃振摇1h，洗涤，pH2.5～2.8甘氨酸盐酸解离透析，纯化McAb和多抗，浓缩抗原和抗体。应用矩阵法，摸索出单-双抗ELISA和ABC-ELISA检测弓形虫特异CAg的最佳条件；根据B1基因序列设计弓形虫保守基因的引物，摸索出PCR循环温度、次数和Mg+浓度等最适宜条件。应用上述三种方法检测孕产妇、精神病患者、献血者、养犬、养猫者等10种特殊人群和普通人群血清样本，进行综合对比分析。结果单-多抗ELISA法检测弓形虫CAg最低浓度为0.25μg／ml；ABC-ELISA检测弓形虫特异CAg最低浓度为0.031μ／ml。弓形虫抗原(抗体)致敏的每克磁粉球1次可纯化抗体(抗原)1.2mg(1.9mg)，纯化后的抗体(抗原)SDS-PAG电泳，无杂蛋白带出现。浓度为0.03μg／ml弓形虫抗原经磁粉球浓缩后，单-多抗夹心ELISA和ABC-ELISA检测均为阳性。与其他寄生虫抗原无交叉反应；弓形虫DNA最少检出量0.1 pg，检测弓形虫特异DNA片段的引物不扩增鼠DNA、人DNA及卡氏肺孢子虫DNA、疟原虫DNA、隐孢子虫DNA。流行病学调查和特殊人群调查中，全省抽取6个县，9类特殊人群共调查2052人，对照组调查2009人。特殊人群的弓形虫检查，ELISA法阳性率平均为3.9％(80／2052)，略低于对照组4.83％(97／2009)，而ABC-ELISA和PCR检测结果均高于对照组，但均无显著性差异(X~2=2.105，P=0.147)、(X~2=0.582，P=0.446)和(X~2=3.342，P=0.068)。献血人群显著高于对照组(X~2=7.709，P=0.005)、(X~2=5.046，P=0.025)和(X~2=10.703，P=0.001)；养犬养猫人群阳性率高于对照人群，但无统计学意义；精神病患者显著高于对照组，单-多抗ELISA法有统计学意义(X~2=4.545，P=0.033)；各地区弓形虫感染率也有较大的差别，淮滨阳性率最低为1.22％(8／655)，淮阳阳性率最高为6.71％(51／760)，两者与平均值7％(185／4661)相比均有显著性差异(X~2=12.393，P=0.000)和(X~2=11.794，P=0.001)。结论本实验所制备的分泌抗弓形虫McAb的杂交瘤细胞系，分泌的McAb具有高效价、高特异的特性；磁粉球是纯化、浓缩抗原或抗体的理想载体。临床上对弓形虫病的诊断应结合临床表现，同时应用2种不同的免疫诊断方法进行诊断；所建立的单-多抗夹心ELISA法、ABC-ELISA法和PCR法检测弓形虫CAg和特异DNA片段的3种方法符合率高、特异性强、灵敏度高，适用于临床应用和大面积流行病学调查。在对特殊人群调查中，精神病患者弓形虫检测阳性率显著高于对照组，说明弓形虫可能为精神病病因之一，在临床上应引起重视；献血员组阳性率明显高于对照组，应高度重视该类人群的弓形虫病防治工作，以最大限度地降低弓形虫对该类人群的危害；养犬、养猫人群弓形虫检测阳性率也稍高于对照组，应加强宠物的防疫工作；各地区弓形虫感染率差别显著，感染率较高的地区应根据当地情况，制定出弓形虫病防治规划，做好防病工作。