为了在蛋白质水平研究这些基因在睾丸组织的表达情况,我们将TCP11基因和ZNF313基因克隆到大肠杆菌中进行表达,并利用表达的蛋白制备抗体,进行组织化学分析,以期了解这些基因在睾丸组织中的表达状态,对其功能进行进行推测.第一部分:人受精促进肽受体TCP11a基因的蛋白表达及细胞组织分布 人TCP11基因编码人受精促进肽受体,该基因存在多个剪切体.我们选择剪切体TCP11a基因进行表达,制备抗体以研究TCP11蛋白在睾丸及精细胞上的分布.通过PCR等分子克隆技术,我们将TCP11a基因克隆到pBV220表达载体上,通过DNA测序及表达产物的N-端测定证实了克隆基因表达产物的正确性.然后我们还对工程菌TCP11a蛋白的表达条件进行了研究,使TCP11a蛋白在工程菌中高效表达.并利用表达蛋白制备的抗体进行了组织化学分析.在上述工作基础上,运用生物信息分析方法,对TCP11基因及TCP11a蛋白进行了深入分析.第二部分:人精子发生相关基因——ZNF313在大肠杆菌中的克隆表达及组织分布 锌指蛋白是一类广泛存在于动植物及人类的DNA结合蛋白.由于能选择性地结合各种DNA和RNA序列,它们在基因的表达调控中起着十分重要的作用.C2H2和C3HC4锌指是较为常见的两种锌指结构域,但很少同时存在于同一个锌指蛋白.而我们克隆表达的ZNF313蛋白却同时含有这两种结构域.利用PCR方法,将人ZNF313基因克隆到pET-32(a)载体上,使之以融合蛋白形式表达.在DNA序列测定、蛋白N-端序列测定证实了克隆表达的正确性后,我们对工程菌发酵条件、蛋白纯化条件进行了研究,并利用纯化的ZNF313蛋白制备抗体供人睾丸组织切片组织化学分析.