【摘 要】
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目的:腺病毒(Adenovirus,AdV)是引起呼吸道感染最常见的病原体之一。其感染能导致严重的呼吸道疾患,尤其是婴幼儿、免疫低下者、器官移植或患有呼吸道疾病者,甚至能导致死亡,因此
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目的:腺病毒(Adenovirus,AdV)是引起呼吸道感染最常见的病原体之一。其感染能导致严重的呼吸道疾患,尤其是婴幼儿、免疫低下者、器官移植或患有呼吸道疾病者,甚至能导致死亡,因此建立有效的防治腺病毒感染措施意义重大。六邻体是腺病毒主要的结构蛋白,能够刺激机体产生相应中和抗体。但腺病毒共有51个血清型,一种型别六邻体抗体能否与其他型别腺病毒发生免疫学反应,能否中和其他型别的腺病毒,对研发多效价的腺病毒疫苗具重要意义。本实验旨在预测不同型别腺病毒六邻体所共有的型间共同的特异性抗原表位,克隆、表达高度保守的腺病毒六邻体蛋白片段,为研发多效价的腺病毒疫苗奠定基础。
方法:对GenBank中已收录的14个型别人呼吸道腺病毒核酸全序列进行比对分析,找出高度保守序列,结合抗原性预测的结果和六邻体蛋白三维空间结构暴露情况,对保守序列进行评价,确定了不同型别腺病毒六邻体所共有的型间共同的特异性抗原表位,选择了六邻体单体蛋白的基因序列进行克隆。以本实验室分离的腺病毒(HAdv)基因组DNA为模板,PCR扩增目的片段,定向克隆构建原核表达质粒pQE31-hexon。
结果:通过生物信息学软件分析后确定六邻体蛋白氨基酸序列267~435比较适合研发多效价的腺病毒疫苗,扩增的基因长508bp。构建了重组质粒pQE31-hexon。
结论:构建了重组质粒pQE31-hexon。为进一步表达、纯化该蛋白做准备,为开发研制预防多型别HAdV感染的多价腺病毒基因工程疫苗奠定了基础。
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