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香蕉是世界第四大粮食作物,在世界粮食生产中占有重要的地位。病虫危害与霜冻、台风等自然灾害都严重威胁着香蕉产业的发展。由于香蕉倍性多样、高度不育的特性,多年来利用传统育种进行品种改良的研究收效甚微。随着分子生物学的发展,利用基因工程手段将各种优良基因导入香蕉,对于培育抗逆、抗病虫害、高产、优质的香蕉种质意义重大。本实验详细研究了香蕉再生体系建立的条件、农杆菌侵染条件及不同的筛选方法,并以ppt作为筛选标记,将置于Ubi启动子控制下的GUS基因通过根瘤农杆菌介导的方法导入香蕉,最终建立了以巴西蕉(Musa paradisiaca.,AAA Group cv. Brasil)低代试管苗横切薄片为受体的香蕉遗传转化体系。主要的研究结果有:1.建立香蕉低代试管苗横切薄片与雄花切片的间接器官发生再生体系:香蕉低代试管苗横切薄片与雄花切片都有很高的间接器官发生能力,是建立香蕉高效间接器官发生再生体系的良好外植体材料。不同激素对巴西蕉不同外植体间接器官发生的影响实验表明:低代试管苗横切薄片在0.5-1.0mg/L 2、4-D+4-6mg/L 6-BA条件下,雄花切片在0.5-1.0 mg/L 2、4-D+0.2-0.5 mg/L ZT条件下,能通过花菜体间接器官发生途径实现高效再生;同时,花菜体横切薄片在1.0mg/L 2、4+0.5 mg/L6-BA条件下能再次通过花菜体途径实现循环高效再生。2.确立较优的抑菌剂和筛选剂的种类及其浓度:巴西蕉低代试管苗横切薄片对头孢霉素(Cefotaxime Sodium)和特泯丁(Timentin)较敏感,当头雹霉素150 mg/L+特泯丁300 mg/L时出芽率不受影响;筛选剂对巴西蕉低代试管苗横切薄片的筛选能力顺序为PPT>潮霉素>卡那霉素;巴西蕉直接再生体系对卡那霉素极不敏感,不适合作为筛选剂;潮霉素的适宜筛选浓度为20-40 mg/L, PPT的适宜筛选浓度为0.1-0.2 mg/L。3.研究了香蕉低代试管苗横切薄片在芽再生诱导阶段对正筛选剂D-甘露糖与D-木糖的敏感性。实验结果表明:香蕉对D-木糖敏感,在D-木糖与蔗糖比例达到10:20时,10d开始显示出毒性,在D-木糖与蔗糖比例达到16:14时能显著抑制香蕉芽的再生,当比例达到25:5时完全抑制香蕉组织的生长,因此,D-木糖能作为香蕉正筛选系统的筛选剂;香蕉对D-甘露糖不敏感,不适合作为香蕉正筛选系统的筛选剂。4.优化农杆菌侵染条件:在农杆菌菌液浓度(OD600值)为1.0、重悬液pH值为5.2、重悬液中乙酰丁香酮浓度为100μmol/L、侵染10 min、26℃的条件下暗培养4天,可以得到较高的GUS基因瞬时表达率,是适宜的侵染条件。5.建立香蕉遗传转化体系:利用农杆菌介导的香蕉低代试管苗横切薄片遗传转化体系,成功地将GUS基因转入巴西蕉基因组中。通过对抗性苗叶片的GUS基因的PCR检测和GUS组织化学法检测,结果表明GUS基因已经整合到材料的基因组中并稳定表达。