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目的:
研究PCA3、AMACR和PSA基因在胎儿前列腺组织发育中的表达情况,为进一步研究此三种基因表达调控机制和生物学功能奠定基础。
方法:
1.本实验的临床病例包括胎儿前列腺组18例,胎龄13~25周,平均19周;良性BPH组21例,年龄51~83岁,平均70岁;PCa组15例,年龄53~80岁,平均70岁。
2.采用本实验室已建立的FQ-RT-PCR方法检测前列腺组织标本中PCA3mRNA、AMACRmRNA、PSAmRNA和GAPDHmRNA的含量。
3.采用管家基因GAPDH来校正前列腺组织标本细胞数,以PCA3mRNA/GAPDHmRNA、AMACRmRNA/GAPDHmRNA和PSAmRNA/GAPDHmRNA进行相对定量。
4.本实验对胎儿前列腺组、良性BPH组和PCa组的前列腺组织标本的PCA3mRNA/GAPDHmRNA、AMACRmRNA/GAPDHmRNA和PSAmRNA/GAPDHmRNA相对含量分别进行了比较和分析。
5.本实验对不同胎龄前列腺组,即13~17周组、18~21周组和22~25周组的前列腺组织标本的AMACRmRNA/GAPDHmRNA和PSAmRNA/GAPDHmRNA相对含量分别进行了比较和分析。
结果:
1.在胎儿前列腺组中18例标本均未检测到PCA3mRNA的表达,在良性BPH组21例标本和PCa组15例标本中均检测到PCA3mRNA的表达,良性BPH组和PCa组中的PCA3mRNA/GAPDHmRNA相对含量有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义。
2.在各实验组中均检测到AMACRmRNA的表达,胎儿前列腺组、良性BPH组和Pca组中的AMACRmRNA/GAPDHmRNA相对含量有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义。在各实验组的两两比较中,我们也可以发现,在任何两组之间AMACRmRNA/GAPDHmRNA相对含量都有较明显的不同,并且从胎儿前列腺组--良性BPH组--PCa组AMACRmRNA/GAPDHmRNA相对含量依次增高。
3.在各实验组中均检测到PSAmRNA的表达,胎儿前列腺组、良性BPH组和PCa组中的PSAmRNA/GAPDHmRNA相对含量有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义。在各实验组的两两比较中,我们也可以发现,任何两组之间PSAmRNA/GAPDHmRNA相对含量都有较明显的不同,并且从胎儿前列腺组--良性BPH组--PCa组PSAmRNA/GAPDHmRNA相对含量依次增高。
4.13~17周组、18~21周组和22~25周组的AMACRmRNA/GAPDHmRNA相对含量有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义。在各实验组的两两比较中,我们可以发现,13~17周组与其他两组的AMACRmRNA/GAPDHmRNA相对含量有较明显的不同,但18~21周组和22~25周组的AMACRmRNA/GAPDHmRNA相对含量未见明显差异。
5.13~17周组、18~21周组和22~25周组的PSAmRNA/GAPDHmRNA相对含量无显著性差异(P>0.05)。在各实验组的两两比较中,我们也可以发现,任何两组之间的PSAmRNA/GAPDHmRNA相对含量亦没有较明显的不同。
结论:
1.PCA3基因是在人类前列腺肿瘤发生发展过程中特异增强表达的,而它在人类胎儿阶段的前列腺细胞发育过程中的可能不起显著作用。PCA3基因在前列腺细胞中可能作为调节基因发挥功能,它可能只在前列腺细胞发生癌变而导致细胞内某些基因表达失控时才出现。
2.AMACR基因可能只在胎儿前列腺发育较早期表达并发挥某种促进细胞组织发展的作用,而到了胎儿前列腺发育中晚期,它的表达逐渐减弱乃至被封闭。当发生前列腺肿瘤时,AMACR基因可能又会被重新激活并高度表达,发挥其在胎儿前列腺阶段类似的作用,并且这种作用效果由于其的过表达而被高度扩大,导致前列腺肿瘤的发展。
3.PSA基因在前列腺细胞发展进程的大部分时期都表达,说明该基因可能对维持前列腺细胞基本功能有意义。
PSA基因在前列腺肿瘤阶段的失控过表达可能
目的:
建立裸鼠皮下LNCaP前列腺癌模型,为前列腺癌动物实验研究提供工具。
方法:
以每只10×106LNCaP细胞数与基底膜基质混合注射入5只BALB/c裸鼠前肢腋窝皮下,于第2至12周分别检测裸鼠血浆tPSA含量,12周后处死裸鼠,取皮下肿瘤及相关器官做病理检查,监测肿瘤生长及转移情况。
结果:
80%(4/5)裸鼠于第8周后在前肢腋窝皮下长出肿瘤,肿瘤包膜完整,病理切片可见典型肿瘤细胞,但5只裸鼠均未发现肿瘤转移;5只裸鼠均可测得血浆tPSA,且血浆tPSA含量随肿瘤生长而升高,其中未长出实体瘤的裸鼠血浆tPSA含量亦随时间推移而升高。
结论:
成功建立了裸鼠皮下LNCaP前列腺癌模型,该模型成功率较高,肿瘤形成时间较一致,肿瘤在形成、生长过程中能持续稳定地分泌PSA,且其分泌量能随肿瘤生长而上升,故此模型可以较好地作为一种前列腺癌的研究工具。