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目的:乳腺癌严重影响女性患者的身心健康,有时甚至会危及生命,是女性患者最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于肺癌。由于临床上缺乏特异性的诊断标志物,大多数患者发现自身患病时已是晚期,失去了治疗的最佳时机。因此,早期发现、早期诊断、早期治疗对于乳腺癌来说仍是当务之急。近年来,自身抗体作为乳腺癌早期诊断的标志物已得到广泛的认可,已经在欧洲和北美洲进行商业应用。本研究采用新的ELISA法检测乳腺癌患者血清中肿瘤相关抗原的自身抗体的水平,研究其在乳腺癌发病中的作用,寻找乳腺癌早期诊断的标志物。方法:本研究共选择4个分子,1个免疫调节因子:转录生长因子β1(Transforming growth factor beta,TGF-β1);3个肿瘤相关抗原:多重肿瘤抑制因子1(multiple tumor suppressor1,P16),肿瘤抑制因子P53(Tumor suppressorp53,TP53),原癌基因C-myc(cancer-myc,C-myc)。利用生物信息学数据库及软件综合分析蛋白结构和性质,设计4个分子的多肽抗原片段,利用优化的ELISA法检测乳腺癌患者血清中4个多肽抗原的相应抗体的水平,同时同时选择健康女性体检者为对照组,以>200例健康女性的混合血为质控样本,采用SPSS20.0软件进行X2检验和ROC曲线分析。结果:1.免疫调节分子:(1)多肽片段: TGF-β1:H-LYQKYSNNSWRY LSN RLLILSKLRLASPPSQ-OH(2)抗体检测:乳腺癌患者外周血anti-TGF-β水平高于健康组(P>0.05),但诊断意义不大。乳腺癌患者anti-TGF-βIgGROC曲线下面积0.516,敏感性为11.5%,特异性为90.4%,结果表明,肿瘤相关分子TGF-β1预测在乳腺癌外周血检测中有较好的阴性预测效率,但无阳性预测价值。2.肿瘤相关分子:(1)多肽抗原片段:本研究中共有3个肿瘤相关蛋白,他们的多肽抗原片段分别为:P16:H-NSYGRLVVLHRAGARLDVRDAWGRLPVDLa-OH;TP53:H-LIRVEGNLRVEYPGTRVRAMAIYKQSQHMTE-OH;C-myc:H-RVKLDSVRVLRQISNNRKCFELLPTPPLSPS-OH(2)抗体检测:乳腺癌的anti-P16IgG水平明显高于健康组(P=0.001),患者的阳性率为22.5%,高于健康组(P<0.05),随着临床分期的升高,阳性率逐渐下降。结果表明,anti-P16IgG对早期乳腺癌有一定的诊断准确性。乳腺癌患者Ⅰ-Ⅲ期阳性率缓慢下降,Ⅳ期又升高。结果显示,anti-P16IgG水平在乳腺癌中诊断意义明显,Anti-P16IgG水平的升高,尤其是早期(Ⅰ期)IgG水平的升高,是乳腺癌的风险因素(P<0.05)。乳腺癌患者anti-P16IgG的ROC曲线下面积为0.730,敏感性为33.3%,特异性为90.0%。表明anti-P16IgG对乳腺癌患者的诊断有意义。乳腺癌患者外周血ati-TP53IgG水平高于健康组(P<0.05),存在统计学差异(P<0.05);Ⅰ期、Ⅱ期亦有统计学差异,乳腺癌患者ati-TP53IgGIgGROC曲线下面积0.616,特异性为90.4%,敏感性为10.5%,其漏诊率和误诊率略偏高,敏感度略偏低,所以其诊断价值不高。乳腺癌的抗C-myc自身抗体水平明显高于健康对照组(P<0.05),有统计学差异,临床各分期亦有统计学差异,但其敏感度和特异度略偏低, AUC为0.686,说明其有一定的参考诊断价值。结论:(1)在乳腺癌患者外周血中,P16自身抗体IgG在乳腺癌患者血清中表达显著增高,具有较高的敏感度和特异度,在乳腺癌早期诊断中具有重要价值,anti-P16IgG可能是一个新的诊断标志物。(2)在乳腺癌患者外周血中,anti-C-mycIgG也可能是一个新的诊断标志物。(3)有研究证实P53和TGF-β在乳腺癌患者体内高表达,但是本研究结果表明,TGF-β1,TP53的循环抗体在乳腺癌患者外周血中并没有明显的发生改变,今后需要重新设计HLA限定的抗原来进行检测。(4)本研究所采用的优化ELISA方法特异性较强,可能成为检测血浆中自身抗体的新方法。