白鲜皮中化学成分的提取分离及活性评价研究

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白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜(Dictammus dasycarpus Turcz.)和狭叶白鲜(D.angustifolius G. Doc)的干燥根皮,是皮肤病的常用中药,具有清热燥湿、祛风解毒之功效,其化学成分以含生物碱类、内酯类、倍半萜及其苷类为主。临床用于治疗湿热疮毒、黄水淋漓、湿疹、风疹等症。论文对白鲜皮中的主要活性成分进行了分离提取研究,初步建立了应用高速逆流色谱(HPCPC)分离纯化白鲜皮中化学成分的新方法,并对其活性成分进行初步评价研究。提取工艺方面,以白鲜碱为指标,分别采用温浸法、超声法和回流法对白鲜皮中的化学成分进行了分离提取对比研究,并应用高效液相色谱法(HPLC)对白鲜碱含量进行定量分析,对比研究表明回流提取法提取完全且不破坏成分,在此基础上,采用回流提取法分别考察了醇浓度、溶剂倍量、提取时间和提取次数四个因素对提取工艺的影响,最后通过正交试验确定白鲜皮中白鲜碱的最佳提取工艺为:白鲜皮药材粗粉,加15倍量80%乙醇回流提取3次,每次提取1h。纯化工艺方面,通过对溶剂系统的筛选、溶剂流速以及螺旋管转速等参数的考察,建立了利用高速逆流色谱法分离白鲜皮中主要生物活性成分的新方法,成功分离得到了三个化合物。确定白鲜皮化学成分分离的最佳条件为当溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(1:1:1:1),流速2.0 mL/min,转速1000 rpm时,成功分离出梣酮;当溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(1:1:1:1),流速1.5 mL/min,转速1200 rpm时,可得到白鲜碱和黄柏酮单体。应用高效液相色谱技术对分离得到的单体化合物进行分析,通过与己知化合物的保留时间相对比,进行定性分析;根据其峰面积百分比,确定其纯度均在98%以上。在此基础上,应用电喷雾串联质谱(ESI-MSn)进一步确定化合物的结构。采用DPPH体外抗氧化活性方法对白鲜皮提取物进行研究,考察了不同提取物对DPPH自由基的清除作用,实验结果表明:白鲜皮提取物对DPPH自由基具有明显的清除作用,其中以回流提取方法较好,以乙醇为提取溶剂其清除自由基的能力好于其他溶剂,且实验表明,以70%乙醇进行提取,白鲜皮醇提物对自由基的清除能力较好。采用滤纸片法研究了白鲜皮乙醇、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、蒸馏水六种提取物及白鲜碱、黄柏酮、梣酮三种单体化合物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、普通变形杆菌、枯草杆菌4种测试菌的抑菌活性。实验结果表明:白鲜皮溶剂提取物、白鲜碱及梣酮单体都具有较好的抑菌活性。
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