论文部分内容阅读
目的:证明缺血低氧预处理后的h OM-MSCs(Human olfactory mucosa mesenchyma stem cell,人嗅黏膜间充质干细胞)通过mi R-181a(micro RNA-181a,微小RNA-181a)介导HSP70(Heat shock protein70,热休克蛋白70)家族的下游靶点GRP78(glucose-regulated protein 78,葡萄糖调节蛋白78)和抗凋亡家族BCL2(B cell lymph OMa-2,B细胞淋巴瘤-2)的下游靶点BCL2来保护线粒体功能,从而保护缺血低氧微环境中的神经元,并在动物实验中验证这一机制。对于缺血性脑卒中的MSCs治疗,这可能提供又一证据支持,也可能为未来缺血性脑卒中的治疗提供新的可行的方法。方法:1,OGD(Oxygen and glucose deprivation,氧糖剥夺)造神经元模型;2,h OM-MSCs的提取、培养、纯化、鉴定;3,分组:将体外实验分成4组,缺血低氧预处理h OM-MSCs组,无预处理h OM-MSCs组,缺血低氧预处理h OM-MSCs+mi R-181a模拟剂组,PBS组;4,Transwell实验。共培养24h后检测下室神经元凋亡、神经元线粒体ROS(reactive oxygen species,活性氧簇)、神经元JC-1线粒体膜电位荧光;5,造MCAO(middle crebral artery occlusion,中动脉栓塞)/Reperfusion模型大鼠;6,体内实验分组:缺血低氧预处理h OM-MSCs组,无预处理h OM-MSCs组,缺血低氧预处理h OM-MSCs+mi R-181a模拟剂组,造模组,假手术组,空白对照组;7,将造模后的大鼠随机分为6组,前三组注入1×106个细胞,体积0.5ml的溶液,造模组和假手术组输入0.5ml的生理盐水,经过鼠尾静脉注射,分别在第1、3、7天对大鼠用m NSS(modified neurological severity score,改良的神经功能缺损评分)予以神经功能评估,包含运动实验、感觉实验、反射丧失和不正常运动、平衡木试验。最高评分18分,最低评分0分,评分越低代表大鼠的神经功能越健全;8,TTC(2、3、5-Triphenyte-trazoliumchloride,2,3,5-三苯基氯化四氮唑)染色试验。结果:(1)缺血低氧预处理36h后h OM-MSCs分泌的mi R-181a明显降低;模拟剂组的mi R-181a明显升高;(2)相对应的缺血低氧预处理36h后的h OM-MSCs表达的BCL2和GRP78明显升高;模拟剂组的BCL2和GRP78明显降低;(3)缺血低氧预处理36h组神经元细胞凋亡率最低;(4)缺血低氧预处理36h组神经元细胞氧化应激水平最低;(5)缺血低氧预处理36h组神经元JC-1的荧光水平最低;(6)缺血低氧预处理36h后h OM-MSCs能改善缺血再灌注SD(Sprague Dawley)大鼠的神经功能。结论:(1)缺血低氧预处理36h后h OM-MSCs能降低mi R-181a分泌,提高BCL2和GRP78的表达;(2)缺血低氧预处理36h后h OM-MSCs能降低缺血缺氧的神经元的氧化应激水平,稳定线粒体膜电位,减少细胞凋亡;(3)缺血低氧预处理36h后h OM-MSCs能改善缺血再灌注SD大鼠的神经功能。