睡莲花药材质量控制方法研究

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目的:研究睡莲花药材的质量控制方法,以期为其质量标准的提高提供依据。1.建立睡莲花药材的HPLC指纹图谱;2.通过网络药理学和分子对接技术明确睡莲花药材的质量标志物;3.完善睡莲花药材的质量评估方法;4.确立适用于鉴别睡莲花药材原植物的DNA条形码,并评价该条形码对睡莲花药材原植物雪白睡莲的鉴别能力。方法:1.在建立睡莲花药材的HPLC指纹图谱的基础上,可以通过对各批次睡莲花药材的相似性分析和聚类分析等多种化学计量学手段对建立的指纹图谱评估;后通过一测多评法计算睡莲花药材中的主要标示性成分,以此来评估不同批次的民族药睡莲花药材的品质。2.基于前期指纹图谱研究结果,通过网络药理学和分子对接对睡莲花的主要标示性成分进行药效预测及分子对接验证,筛选得到睡莲花药材的主要药效成分。3.依据《中国药典》2020版相关技术方法,对药材进行性状鉴别、薄层鉴别、检查(水分、灰分、浸出物)、含量测定(睡莲酚和鞣花酸)的研究;4.利用rbc L、mat K、ITS2、ITS、psb A-trn H、rpo C1、ycf5条形码序列对睡莲样品进行扩增,通过扩增的样品进行测序,进而获得测序数据,然后使用MEGA软件中的Clustal W插件对测序结果进行剪切比对,计算遗传距离,构建系统发育树,以探究睡莲属植物的系统发育关系。结果:1.17批睡莲花药材与参照图谱S16的相似度在0.901~1.000之间,并明确了11个共有峰,对7个共有峰进行了指认。2批市售图谱与S16图谱相似度为0.568和0.730,说明栽培和野生睡莲花药材与市售样品之间化学信息差异较大。主成分分析、聚类分析法、偏最小二乘-判别分析结果证明了这一结论。一测多评结果显示,没食子酸甲酯、睡莲酚、老鹳草素、鞣花酸、烟花苷和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的相对校正因子分别为0.9650、0.9740、1.2013、0.1754、1.1603、2.1173,RSD分别为0.37%、38%、0.32%、1.76%、0.37%和0.08%(n=6);17批药材以没食子酸为参照物,一测多评法测定结果与外标法测定结果接近。2.通过网络药理学和分子对接技术确定了睡莲花药材中主要药效成分是睡莲酚和鞣花酸,为后续睡莲花药材质量标准的提高提供了参考。3.提高了睡莲花药材的质量评价方法,为睡莲花药材的质控提供了参考依据;4.利用DNA条形码技术确定了适用于鉴别雪白睡莲的以ITS2和psb A-trn H序列作为核心基因片段,ycf5和rpo C1作为辅助片段的DNA条形码。结论:建立的睡莲花药材指纹图谱可以有效地鉴别睡莲花药材的成分,从而为质量控制提供了可靠的依据;原植物DNA条形码的确立可以更准确地鉴定雪白睡莲,使睡莲花药材的物质鉴定更加完善;制定的质量控制方法操作简便,并且各个方法学的考察结果均符合要求,具有广泛适用性的特点。
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