天然性抗病毒因子是一种具有抗病毒作用的宿主内源性免疫因子,是宿主与病毒周而复始的斗争中形成的抵抗病毒侵害的重要方式,在机体的免疫系统中扮演者重要的角色。研究表明,锌指蛋白(Zinc-Finger Protein)也是一种天然宿主内源性免疫因子,主要分布在动植物和微生物中,它可以调节细胞因子如白细胞介素、干扰素的表达,并直接调控淋巴细胞的生长和分化。鸡CCCH型锌指抗病毒蛋白(chZAP)是2002年通过体细胞克隆的功能基因组的方法筛选得到的宿主抗鼠白血病病毒(MLV)的蛋白因子,在鼠成纤维细胞中过表达chZAP能抑制MLV的复制。chZAP对引起人和动物发生的烈性病如埃博拉病毒、马尔堡病毒等有明显的抑制作用,但对于疱疹病毒、以及黄热病毒等并没有表现出其活跃的抗病毒活性,这表明chZAP不具有广谱抗病毒特性。尽管如此,关于其对禽类病毒的抗病毒活性知之甚少,对其结构和功能更是有待研究。现已证明,chZAP是通过降解病毒的mRNA来实现它的抗病毒作用,并且有研究表明其参与了T细胞的免疫反应,但其抗禽病毒谱却至今未知。本研究通过真核表达鸡chZAP,探究其对四种禽类经典病毒的抗病毒作用,将为开发新的天然免疫药物或禽类疫病的防控提供新的思路。为探究这一问题,首先扩增得到chZAP基因,将目的基因连接到真核表达载体pBacPAK8上,构建重组杆状病毒质粒,将pBacPAK8-chZAP转染至sf9细胞中,制备P1代杆状病毒,将P1代杆状病毒接入sf9细胞后,制备P2代杆状病毒,然后进行杆状病毒的扩繁,收集细胞裂解液上清以及细胞培养上清进行目的蛋白的真核表达。结果显示,在细胞裂解上清和细胞培养上清中均有chZAP的表达,然后采用镍柱法对表达成功的chZAP进行纯化。为确定其抗禽病毒谱,我们采取了体外验证的方法,探究其抗病毒作用:培养DF-1细胞,接种马立克氏病毒(MDV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、禽网状内皮组织增生病毒(REV),持续培养48h后,接入适宜浓度的chZAP蛋白,维持培养24h后,通过qPCR来检验三个实验组的病毒载量水平,通过western blot检验两个实验组的蛋白水平上变化。结果发现,chZAP蛋白对MDV有没有明显的抑制效果,而对NDV、IBDV、REV有明显的抑制效果。本研究运用真核表达载体pBacPAK8成功建立chZAP体外表达方法,体外试验探索chZAP对四种禽类经典病毒NDV、MDV、IBDV、REV的抗病毒作用,旨在确定chZAP发挥抗病毒作用的靶病毒类型。理论上,通过分析chZAP的靶病毒类型,为揭示chZAP的抗病毒机制提供参考。实践上,在一定程度上指导新型抗病毒药物的开发。