地龙炮制工艺、药效及辅料研究

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目的:通过测定11批次黄酒的总糖、总酸、氨基酸态氮、PH值、酒精度等指标去制定黄酒标准,并撰写黄酒草案,建立黄酒的指纹图谱,探讨黄酒的稳定性及重复性。优选生地龙和酒地龙的炮制工艺,以次黄嘌呤和肌苷含量为指标,通过加权得分,得出最优工艺。探讨生地龙和酒地龙不同炮制品药理作用差异,研究地龙不同炮制品的平喘和抗血栓作用,完善地龙药理药效作用,并建立有效的地龙炮制方法。方法:(1)采用滴定法测定黄酒的总糖,氨基酸态氮和总酸;通过酒精计测定黄酒酒精度;PH计测定黄酒PH值;采用电感耦合等离子发射光谱(ICP-AES)测定黄酒钙因素的含量;采用气相方法测定黄酒中甲醇含量;采用高效液相色谱法建立黄酒的氨基酸指纹图谱。(2)采用高效液相色谱法对地龙的次黄嘌呤和肌苷含量进行测定,通过加权得分分析最佳工艺。(3)以哮喘潜伏期为评价指标,采用药物喷雾致豚鼠哮喘法进行实验,比较地龙生品及其炮制品酒制地龙水煎液高剂量和低剂量的平喘作用。将小鼠分为4组,分别为空白组,阳性药组,生品地龙组、酒制地龙组,通过凝血时间,尾出血时间以及对胶原蛋白-肾上腺素诱导的血栓形成模型小鼠偏瘫和死亡率的影响来研究不同炮制品抗血栓作用的差异,将SD大鼠分为6组,分别为空白组,模型组,生品地龙低剂量组,生品地龙高剂量组,酒制地龙低剂量组,酒制地龙高剂量组,通过血流变实验和血清中的TXB2、6-keto-PGF的含量来研究地龙炮制品的抗血栓作用。结果:(1)总糖含量标准制定为21.81-32.71g/L、总酸含量标准制定为4.74-7.10g/L、氨基酸态氮含量标准制定为0.66-0.98g/L、PH值标准制定为3.13-4.69、酒精度标准制定为12.8-19.2%、非糖固形体标准制定为30.48-45.72g/L,钙因素标准制定为249.17-373.76g/L,甲醇含量不得过0.04g/L,黄酒的指纹图谱共有19个共有峰,其中已对应了五种氨基酸,相似度均大于0.98。(2)生地龙最佳炮制工艺为切短段(5mm),淘洗2分钟,40℃烘干。酒地龙最佳炮制工艺为每100g饮片加酒12.5g,闷润90分钟,140℃炒制。地龙最佳中试工艺为:取适量原药材,除去杂质,在切药机上切成58mm的短段,在洗药机上冲洗2min,然后取出于60℃烘房中干燥。酒地龙中试最佳条件为:取净地龙饮片5kg,加入黄酒(每100kg地龙饮片,加入黄酒12.5kg)拌匀,在密闭容器内闷润90min,置滚筒式炒药机中,220℃加热,转速设置为45 r/min,炒制8分钟,取出,摊开,放凉。(3)地龙水煎液对喷入2%氯化乙酰胆碱和0.1%磷酸组胺的等量混合液而致喘的豚鼠,能导致它的哮喘潜伏期明显延长(P<0.05或P<0.01),而出现十分显著的缓解哮喘的作用。其中,酒制地龙低剂量的平喘作用效果最好。从凝血时间、尾出血时间和血栓模型实验结果来看生品地龙组和酒制地龙均有抗血栓作用。从急性血淤模型大鼠血流变实验来看,与模型组比,各地龙组的全血还原粘度指标均有明显的降低,血清中的TXB2含量各地龙组均有下降,各地龙组的6-keto-PGF1α含量均有升高。结论:制定了黄酒质量标准,且11批次黄酒各指标合格率均大于80%,证明本课题制定标准范围合理,地龙酒制后可以增强其平喘作用,生地龙抗血栓作用比酒地龙略强。本课题建立合理的黄酒标准,建立了有效的炮制工艺,对黄酒和地龙质量控制具有重大意义。
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