论文部分内容阅读
CD82(KAI1)属于四跨膜蛋白家族(tetraspanin superfamily)的重要成员之一。其主要生物学功能是参与细胞运动、迁移的调节。KAI1/CD82广泛表达于各种正常的组织细胞,在肿瘤组织中表达降低或不表达。最初研究发现KAI1/CD82是前列腺癌特异的转移抑制因子。后来大量的实验结果表明,其在各种不同组织来源的肿瘤中均有表达。因此,KAI1/CD82被认为是广谱的肿瘤转移抑制因子。KAIl/CD82的肿瘤转移抑制能力于1995年被首次报道,但其详细作用机理尚不完全清楚。阐明KAI1/CD82的肿瘤转移抑制机制,首先要弄清楚KAI1/CD82转移抑制作用的分子结构基础。已知KAI1/CD82的分子结构由胞外区、跨膜区和胞内区三部分组成。胞外区形成一个小环(small extracellular loop, SEL)和一个大环(large extracellular loop, LEL)。跨膜区为四个疏水的肽段;胞内区包括N-端、C-端和一个细胞内环。目前,有关KAI1/CD82分子的胞外区大环结构、跨膜区和胞内区功能的研究很多。KAI1/CD82胞外区大环(CD82-LEL)的功能主要是参与KAI1/CD82的二聚化以及与其它膜蛋白的相互作用;跨膜区的几个极性氨基酸通过与其它四跨膜家族蛋白如CD9、CD81等相互作用形成多聚体;胞内区氨基酸残基的脂酰化有利于KAI1/CD82N-端和C-端在膜上的锚定并参与KAI1/CD82与其它四跨膜家族蛋白的相互作用。但有关KAI1/CD82胞外区小环(KAI1/CD82-SEL)功能的研究及报导很少,其作用尚不清楚。在本论文中,为研究KAI1/CD82-SEL在KAI1/CD82抑制肿瘤转移中的作用,我们采用化学合成的方法合成了KAI1/CD82-SEL肽段,采用划痕法、化学趋化技术对其体外细胞迁移抑制作用进行了观察,同时采用免疫印迹技术对其迁移抑制作用的分子机制进行了初步研究。并对KAI1/CD82-SEL寡肽和完整KAI1/CD82分子的运动抑制能力和作用机制进行了初步的比较分析。该课题的研究,对阐明KAI1/CD82抑制肿瘤转移的分子机理,研制抗转移药物,具有十分重要的理论意义和潜在的应用前景。结果:(1)KAI1/CD82-SEL可抑制SW620细胞和MDA-MB-231细胞体外侵袭及迁移。其抑制能力随KAI1/CD82-SEL浓度升高而增强。在50μg/mL浓度时,SW620细胞体外迁移完全被抑制(P<0.001);在80μg/mlL浓度时,MDA-MB-231细胞体外迁移完全被抑制(P<0.001)。(2)KAI1/CD82-SEL对EGFR及其相关信号通路的影响:KAI1/CD82-SEL可显著抑制SW620细胞EGFR的1173酪氨酸位点及Akt473丝氨酸位点的磷酸化(P<0.001);且可显著抑制MDA-MB-231细胞EGFR的1173酪氨酸位点、845酪氨酸位点、及Akt473丝氨酸位点的磷酸化水平(P<0.001)。(3)人高转移结肠癌细胞SW620转染KAI1/CD82过表达质粒后,可降低SW620细胞的转移能力,但其抑制效果明显低于KAI1/CD82-SEL的抑制效果(P<0.001)。通过对二者机制的研究发现,在SW620细胞中,KAI1/CD82-SEL可显著抑制EGFR1173酪氨酸位点及Akt473丝氨酸位点的磷酸化水平(P<0.001),而KAI1/CD82完整分子则能够抑制(?)EGFR1045酪氨酸位点及ERK的磷酸化水平(P<0.001)。以上结果说明,KAI1/CD82-SEL肽段和KAI1/CD82完整分子的作用机制不完全相同。结论:(1)KAI1/CD82-SEL寡肽对多种组织来源的肿瘤细胞,包括人高转移结肠癌SW620细胞和人高转移乳腺癌MDA-MB-231细胞运动迁移能力均有强烈的抑制作用。(2)KAI1/CD82-SEL寡肽抑制SW620细胞和MDA-MB-231细胞运动迁移的机理可能通过抑制EGFR的自身磷酸化及下调细胞内PI3K/Akt信号转导通路实现。但对不同来源的肿瘤细胞,其作用机制不完全相同。(3)KAI1/CD82-SEL肽段的抑制效率高于KAI1/CD82完整分子,且二者的作用机制不同。