新城疫和禽流感精制卵黄抗体的制备及其应用研究

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新城疫和禽流感是目前危害我国养禽业的两大主要传染病,目前预防治疗这两种疾病的主要手段是疫苗防疫和化学药物的辅助治疗。随着人们对食品安全问题越来越关注,化学药物和抗生素药物的辅助治疗受到限制。抗体属于被动免疫,具有安全、特异、高效、无残留等优点,在临床上具有良好的预防治疗疾病的作用。本研究利用常规方法免疫产蛋鸡获得高免鸡蛋,然后,比较利用泊洛沙姆辛酸法、海藻酸钠辛酸法和聚乙二醇法提取、纯化卵黄中的抗体。最终筛选出利用聚乙二醇法提取抗体效果最优,采用该方法提纯的精制卵黄抗体去脂彻底、抗体性状稳定、效价高,抗体回收率可达88.4%。为确定精制卵黄抗体的生物活性,采用固定病毒稀释抗体的方法分别对新城疫、禽流感H9N2和H5(RE-4)等病毒进行鸡胚中和试验,测定其抗体中和效价。测得精制卵黄抗体的中和效价分别为:新城疫为1:16384,H9N2为1:11068834,H5(RE-4)为1:16384,均表现出了非常强的病毒中和能力。而在精制卵黄抗体中,新城疫、禽流感H9N2和H5(RE-4)分别对应的HI效价分别为1:4096、1:8192、1:256。比较发现:精制卵黄抗体的HI效价均远远低于其对应的病毒中和效价。该结果进一步提示:精制卵黄抗体的病毒中和能力不能完全利用HI效价来衡量。对血清的重复检测亦得出类似的结论。此外,我们还对精制卵黄抗体的不同接种方式和途径及其抗体在体内的消长规律进行了研究。选取60日龄的SPF鸡60只,随机分成三组:注射试验组,口服试验组和对照组,注射试验组肌肉注射精制卵黄抗体,1mL/只;口服实验组,人工口服精制卵黄抗体1mL/只。结果发现:/肌肉注射组的ND、H5(RE-4和RE-6)和H9N2抗体在注射后14d内,各时间点的抗体水平均显著高于对照组(P<0.01);且注射后抗体滴度快速达到峰值,高抗体水平可维持7d,此后缓慢下降。新城疫和禽流感H9亚型抗体消长规律比较类似。RE-4和RE-6两种不同遗传进化分支的抗体相对较低。口服抗体效果较差,与空白对照无差异。为确定精制卵黄抗体对鸡群的保护性,选取100只60日龄的SPF鸡随机分成5组,以新城疫为例,进行治疗保护试验,其中设预防组、高剂量治疗组、低剂量治疗组、阴性对照试验组和阳性对照实验组。预防实验组在攻毒前1d肌肉注射精制卵黄抗体1.0mL/只;高剂量组在攻毒后48h肌肉注射精制卵黄抗体1.0mL/只;低剂量实验组在攻毒1d后肌肉注射精制卵黄抗体0.5mL/只;阴性对照组不作任何处理,阳性对照组只进行攻毒。结果显示:精制卵黄抗体对新城疫的预防保护效果高达100%,高剂量治疗组保护率高达90%,低剂量组保护率为80%。这表明肌肉注射新城疫精制卵黄抗体具有良好的预防和治疗新城疫疫病的作用。
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