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目的1.应用Meta分析的方法,对中医外治法治疗AD的有效性和安全性作出客观评价。并对入选文献外用药物进行组成分析,结合专家临床经验,初步筛选出适合治疗AD的外用中药。2.应用2,4二硝基氟苯(DNFB,2,4-dinitrofluorobenzene)对C57BL/6小鼠进行致敏和激发,建立特应性皮炎样小鼠模型。3.运用特应性皮炎样小鼠模型,评价入选药物对特应性皮炎样小鼠模型皮损表现及瘙痒症状、免疫功能和丝聚蛋白表达的影响,并探讨其在调节TH1/TH2平衡及修复患者皮肤屏障障碍方面的作用机制。筛选出适合外用治疗AD的中药。方法1.根据检索策略,搜索常用数据库1989-2015年间中医外治法治疗AD的随机对照试验。根据纳入标准和排除标准,对文献进行筛选,按照CONSORT声明和Jadad计分法以及Cochrane评价手册Handbook 5.1版中的质量评价标准,对纳入研究的文献进行质量评价。采用RevMan5.2对效应量进行合并统计分析。对入选文献的外用药物进行组成分析,结合咨询导师及其他临床皮肤科专家的意见。2.10只雌性7周龄C57BL/6小鼠随机分为2组:模型组和对照组(n=5)。AD样皮损的诱导:致敏前一天对小鼠背部剃毛,致敏阶段:实验第1日,对空白对照组小鼠用丙酮橄榄油4:1混合物的基质均匀涂于小鼠除毛后的背部皮肤。模型组小鼠除毛后的背部皮肤均匀涂以50 μ L的0.5%DNFB溶液。激发阶段:实验第5日,取50 μ L的0.2%DNFB溶液,均匀涂在模型组小鼠背部皮肤。取20u10.2%DNFB溶液,均匀涂于模型组小鼠右侧耳部。空白对照组小鼠用丙酮橄榄油4:1混合物的基质对背部皮肤及耳部进行相同处理。其后每隔2日如此重复刺激1次。随后每周重复刺激1次,以维持皮损。第29日观察小鼠皮损表现,计10min内小鼠搔抓次数及耳部厚度增加值,留取血清及皮损组织标本。采用ELISA方法测量小鼠血清IgE、IL-4及IFN-γ水平;10%甲醛固定皮损组织,制作病理切片;采用RT-PCR方法检测小鼠皮损区的IL-4及IFN-γmRNA的相对表达量。采用免疫组化的方法对皮损组织的中间丝聚蛋白平均光密度值进行检测。3.30只7周龄C57BL/6小鼠随机分为6组:模型组、激素组(0.1%丁酸氢化可的松乳膏)、马齿苋低剂量组及马齿苋高剂量组(n=5)、中草药ADH01低剂量组及中草药ADH01高剂量组(n=5)。按照前述造模方法进行特应性皮炎样小鼠模型的造模。自激发阶段开始,各组小鼠每日按照规定的剂量给予外用相应剂量的马齿苋水提物、中草药ADH01水提物和0.1%丁酸氢化可的松乳膏,模型组小鼠不给予药物干预。4周后观察小鼠皮损表现,计10min内小鼠搔抓次数及耳部厚度增加值,留取血清及皮损组织标本。采用ELISA方法测量小鼠血清IgE、IL-4及IFN-γ水平;10%甲醛固定皮损组织,制作病理切片;采用RT-PCR方法检测小鼠皮损区的IL-4及IFN-y mRNA的相对表达量。采用免疫组化的方法对皮损组织的中间丝聚蛋白平均光密度值进行检测。结果1.Meta分析结果提示,在入选研究中,17项研究的治疗组总有效率优于对照组[OR=1.79,95%CI(1.27,2.80),P<0.05];12项研究的治疗组痊愈率优于对照组[OR=1.65,95%CI(1.27,2.15),P<0.05];9项和5项研究分别显示试验组的不良反应发生率及复发率均低于对照组[OR=0.23,95%CI(0.11,0.47),P<0.01;OR=0.14,95%CI(0.05,0.37),P<0.01]。通过入选文献的外用药物组成分析,结合导师及其他临床专家经验,确定采用马齿苋及中草药ADHO1的水提物剂型,以高、低剂量及外洗的方式给药.2.两组小鼠皮损炎症及组织病理变化:模型组小鼠出现红斑、渗出,脱屑及苔藓样变的背部皮损及耳部肿胀明显。皮损组织病理学显示模型组小鼠皮肤可见角化过度,棘层增厚,真皮层见较多淋巴细胞为主的炎性细胞聚集;与空白对照组相比,模型组的搔抓次数及耳部厚度增加值明显较高(P<0.05);模型组的血清IgE、IL-4水平明显较高(P<0.05);模型组的皮损IL-4mRNA相对表达量明显较高(P<0.05);模型组的皮损FLG的OD值明显较低(P<0.05)。3.各组小鼠皮损炎症及组织病理变化:马齿苋组、中草药ADH01组及激素组小鼠皮肤红斑减轻,无渗出、无明显脱屑,苔藓样变减轻。马齿苋组及中草药ADHO1组小鼠的皮肤棘层增厚减轻,淋巴细胞浸润减轻。激素组表皮角化过度,皮肤棘层增厚减轻,淋巴细胞浸润减轻。与模型组相比,马齿苋组、中草药ADHO1组及激素组皮损严重程度评分均较低(P<0.0125);马齿苋组、中草药ADH01高剂量组及激素组搔抓次数均较少(P<0.05),马齿苋组、中草药ADHO1组及激素组耳部厚度增加值均较低(P<0.0125);马齿苋组、中草药ADHO1高剂量组及激素组血清IgE均较低(P<0.05);马齿苋组及激素组血清IL-4水平均较低(P<0.05);激素组血清IFN-γ水平明显较低(P<0.05),马齿组血清IFN-γ水平无统计学差异(P>0.05);马齿苋高剂量组及激素组皮损IL-4mRA相对表达量均较低,(P<0.0125);马齿苋高剂量组皮损IFN-γ mRA相对表达量较高(P<0.125),激素组皮损IFN-γmRNA相对表达量明显较低(P<0.125);马齿苋高剂量组、中草药ADH01高剂量组FLG的OD值较高(P<0.05)。与激素组相比,马齿苋组及中草药ADHO1高剂量组搔抓次数均较多(P<0.05);马齿苋组及中草药ADHO1组耳部厚度增加值明显较高(P<0.0125);马齿苋低剂量组血清IgE较高(P<0.05)。与马齿苋低剂量组相比,马齿苋高剂量组与中草药ADHO1组的皮损严重程度评分间无差异(P>0.0125);马齿苋高剂量组搔抓次数较低(P<0.05),马齿苋高剂量组、中草药ADHO1高剂量组耳部厚度增加值较低(P<0.05),马齿苋高剂量组血清IgE水平较低(P<0.05),与马齿苋高剂量组相比,中草药ADHO1高剂量组搔抓次数较高(P<0.05);中草药ADHO1组耳部厚度增加值较高(P<0.05),中草药ADH01高剂量组血清IgE水平较高(P<0.05)。与中草药ADHO1低剂量组相比,中草药ADHO1高剂量组耳部厚度增加值较高(P<0.05)。结论1.本研究通过对中医外治法治疗AD的文献进行Meta分析,证明了与单用西药治疗相比,中医外治法治疗AD有更好的临床疗效以及更低的不良反应发生率和复发率。本研究对中医外治法治疗AD的有效性和安全性作出客观评价,为中医应用外治法治疗AD提供了有力的循证医学依据。通过对入选文献的外用药物组成进行分析,结合导师及其他专家临床经验,确定了入选药物的种类、剂型及剂量,进行进一步的评价和筛选。2.成功应用DNFB刺激C57BL/6小鼠的方法构建特应性小鼠模型,小鼠出现明显的AD样皮损改变,血清IgE、IL-4明显升高,皮损IL-4mRNA表达增加,皮损FLG水平下降,均与AD患者的临床表现及实验室指标相似。该模型可用于进行AD发病机制、治疗及转基因等方面研究。3.经过动物实验对入选药物马齿苋和中草药ADHO1的进一步的筛选和评价,高剂量马齿苋及高剂量中草药ADH01外用均能明显降低特应性皮炎样小鼠模型的皮损严重程度,缓解瘙痒症状、降低血清IgE水平及促进表皮屏障相关的终末分化蛋白FLG的表达,帮助表皮屏障结构修复,高剂量马齿苋还能纠正TH1/TH2失衡。马齿苋和中草药ADH01外用治疗AD均有明显疗效,适合进行进一步的研究开发。后期研究需加大中草药ADH01孢子比例,以进行相关免疫学研究。外用制剂可以考虑采取新的剂型,以发挥最佳药效。