【摘 要】
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小鼠诱导性多能干细胞(mouse induced pluripotent stem,miPS)是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞。在特定的条件下,诱导多功能干细胞可以增殖并分化为多种类型的细胞,但
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小鼠诱导性多能干细胞(mouse induced pluripotent stem,miPS)是一类具有自我更新和多向分化潜能的特殊细胞。在特定的条件下,诱导多功能干细胞可以增殖并分化为多种类型的细胞,但保持干细胞的高增殖率和未分化状态则高度依赖于其所处的生长微环境,即干细胞壁龛。干细胞与其壁龛之间通过相互作用,实现miPS自我更新能力和分化之间的平衡。如何在体外构建一个这样的微环境是miPS研究的重要环节。本研究采用不同浓度甲醛(formaldehyde,FA)固定小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)作为饲养层细胞,体外培养miPS。探讨化学固定后MEF细胞膜流动性对miPS克隆形成率以及干细胞生物特性的影响,筛选适宜的miPS体外培养条件。研究结果表明,利用2.5%FA温和固定MEF饲养层细胞,可保持饲养层细胞膜表面的流动性,这种稳定的微环境能够滋养miPS在体外增殖,并保持miPS的自我更新能力和未分化的稳定性,培养出高纯度的miPS细胞。本实验的创新之处在于﹕1.采用温和的FA化学固定的MEF作为饲养层细胞,不但保持饲养层细胞膜流动性,而且具有饲养层细胞的生物活性,保持miPS细胞的高增殖率和未分化的特性。2.经过甲醛固定的饲养层细胞避免了iPS生长的污染问题,化学固定法方便简单,适用于大规模的体外培养干细胞研究。
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