【摘 要】
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RALDH2是一种在发育时期合成视黄酸(RA)的关键酶。在未分化的体节、肢芽和其他各种器官中都能探测到其基因的表达。RALDH2这种酶不仅合成RA,其表达还受到RA的负反馈抑制。但是
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RALDH2是一种在发育时期合成视黄酸(RA)的关键酶。在未分化的体节、肢芽和其他各种器官中都能探测到其基因的表达。RALDH2这种酶不仅合成RA,其表达还受到RA的负反馈抑制。但是,此抑制作用的具体机理仍然还不清楚。前人的研究表明raldh2是RA直接作用的靶基因,而且RA会使raldh2的表达下降。因为raldh2的基础启动子的活性并不是很高,因此本论文将研究重点放在raldh2的第一内含子中。raldh2启动子的细胞转染实验表明RA能直接抑制raldh2的表达。这些数据均说明了RA的合成和降解的过程受到一种反馈抑制机制调节。本论文中,通过生物分析软件发现斑马鱼raldh2基因的启动子上游约2.7kb序列,没有查找到可能的与RA信号通路有关受体转录因子的结合位点,然而在其第一内含子中发现多处可能的与RA信号通路有关受体转录因子的结合位点,即视黄酸反应元件(RAREs)。接下来克隆了这些斑马鱼的raldh2基因的第一内含子片段中RAREs可能密集存在的区域,即第一内含子的自+2109上游片段和第一内含子自+13573到+15115的片段(以raldh2的第一个外显子的的第一个碱基定义为+1位置,其上游第一个碱基为-1),并将其与raldh2的上游约2.7kb启动子片段一起构成含有报告基因的检测质粒,从而检测这些功能片段对RA的响应能力。通过体内外实验数据发现起着关键性作用的RAREs存在于raldh2的第一内含子中的+13573到+15115的区域中,而且RA信号对raldh2基因的表达调控所呈现的反馈抑制现象可能与N-CoR相关。
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