莲心碱诱导胰腺癌细胞发生S期阻滞和凋亡及其机制探究

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目的:胰腺癌是一种恶性程度极高的消化系统恶性肿瘤。近年来其发病率呈明显增加趋势,而针对胰腺癌治疗的研究仍未取得突破性进展。仅有少部分早期患者有手术根治的机会,而对于失去根治性手术机会的大部分患者来讲,只能被迫选择姑息性手术及化疗药物治疗。目前临床应用的一线化疗药物并不能显著的延长患者的生存期,而且在治疗的同时对人体也有较为严重的毒副作用。因此,寻找有效且相对安全的疗法和药物仍是目前关于胰腺癌治疗的重要研究方向。莲心碱是一种从成熟莲子的胚芽中提取出来异喹啉生物碱,近年来一些研究发现其具有抗肿瘤的作用。但莲心碱对胰腺恶性肿瘤的发展是否具有抑制作用目前还不清楚。本研究目的即为通过体外和体内实验探究莲心碱对胰腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,并初步探究其可能的分子机制。方法:CCK-8法检测莲心碱对两株胰腺癌细胞系MIA PaCa-2和PANC-1细胞增殖的影响。克隆形成实验检测莲心碱对MIA PaCa-2和PANC-1细胞克隆形成能力的影响。流式细胞术及Hoechst33342染色法检测莲心碱对MIA PaCa-2和PANC-1细胞周期及凋亡的影响。蛋白质免疫印迹实验检测细胞周期相关蛋白(CDK 2和Cyclin A)和细胞凋亡相关蛋白(活化型caspase 9、活化型caspase 3、剪切型PARP、Bcl-2、Bax)的表达。裸鼠皮下成瘤实验在动物水平检测莲心碱对人胰腺癌细胞成瘤的影响。结果:莲心碱可抑制MIA PaCa-2和PANC-1细胞的增殖能力和克隆形成能力,且这种抑制作用呈现剂量及时间依赖性。莲心碱可使MIA PaCa-2和PANC-1细胞阻滞于S期并促进其凋亡。经莲心碱处理后,随莲心碱处理浓度的升高,MIA PaCa-2和PANC-1细胞中活化型caspase 9、活化型caspase 3、剪切型PARP、Bax表达水平逐渐升高,而Bcl-2表达水平及其与Bax表达水平的比值逐渐降低。莲心碱抑制裸鼠皮下瘤的生长,且抑制水平随莲心碱处理浓度的增高而增高。结论:莲心碱抑制人胰腺癌MIA PaCa-2和PANC-1细胞的增殖,并诱导这两种胰腺癌细胞发生S期阻滞及凋亡。此作用是通过调控细胞周期相关蛋白的表达和影响细胞线粒体凋亡途径而发生的。
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