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本文从广西大学东区市场下水道中筛选获得一株产大豆蛋白酶的细菌D-16,经初步鉴定属于芽孢杆菌属(Bacillus)。该菌能在20-45℃范围内生长,生长的pH范围为pH6.0-12.0。
通过对初筛菌株进行紫外诱变和HNO2化学诱变,结合筛选,最后得到突变菌株D-16-9。
初步探讨了菌株D-16-9产大豆蛋白酶的产酶和生长过程,以此为基础,采用了不同营养成分的培养基,并实验了几种对产酶有促进作用的诱导物质。结果发现菌株D-16-9可以利用无机氮源生长,但用来产酶则很差;有机氮源利于生长和产酶,适当添加诱导物更利于产酶;酶合成模式属于滞后合成型,大量收获在菌体生长的稳定期。
通过实验确定发酵培养基的最佳组成:5.0%玉米粉、3.0%大豆豆粕、0.05%氯化钾、0.05%硫酸镁;确定最适发酵条件为:起始pH10,培养温度30℃、种龄24h、接种量10%,250ml三角瓶中装入100ml发酵培养基,摇瓶转速170r/m,发酵时间120h。综合最佳的培养基组成和培养条件,最终大豆蛋白酶活达6500U/ml,该酶作用的最适pH为10.5,pH7.0-12.0的范围内较稳定;pH10保温60min酶活力维持在80%以上。最适温度为40℃,在60℃以下范围内,该酶具有良好的稳定性;70℃处理40min酶活力完全丧失。硫酸铜、硫酸镁、硫酸铁、氯化钾、氯化钙对酶活力影响不大,而醋酸铅、EDTA则明显抑制酶活力。