多西他赛(docetaxel)是一种半合成的紫杉类衍生物,为细胞周期特异性广谱抗癌药。虽然多西他赛具有很高的抗癌活性,但是其水溶性差大大限制了多西他赛的发展应用。市售制剂泰索帝含大量吐温-80,会引发严重不良反应,应用前须多次服用糖皮质激素类药物以防过敏反应和液体潴留,临床应用不便,所以有必要开发一种新的剂型以改善多西他赛的溶解性能。阳离子脂质体早期作为基因载体广泛应用于基因转染和基因治疗的研究,近来也有学者将阳离子脂质体作为抗肿瘤药物的载体展开研究。阳离子脂质体通常是由一种阳离子两亲性化合物和一种中性磷脂组成的封闭囊泡,磷脂分子的疏水尾部聚集在一起,避开水相,而亲水头部暴露在水相。如将多西他赛扦插于磷脂双分子层疏水尾部之间,则会避开与水的直接接触,提高在水中的溶解度。肿瘤新生血管生长快速,其内皮细胞表面携带的负电荷远大于普通静态血管,阳离子脂质体可以通过静电作用与肿瘤新生血管内皮细胞相互作用,被迅速吞噬,同时破坏内吞小体的脂膜,将药物释放到胞浆中,加快药物从胞浆到细胞核的转运速度。这种机制显著提高了药物在肿瘤区的聚集和释放。目的:本研究将多西他赛载入含阳离子磷脂的的脂质体中,以提高多西他赛的溶解度和治疗效果,并对所得制剂的体内药动学及体内外药效学进行考察。方法:建立主要组成材料多西他赛、DOTAP-Cl、DOPC的含量以及包封率测定方法并进行方法学验证。多西他赛阳离子脂质体的制备方法采用乙醇注入法,载药方式为被动载药。选择DOTAP-Cl(1,2-二油酰基羟丙基-3-N,N,N-三甲胺氯)和DOPC(1,2-二油酰磷脂酰胆碱)作为组成磷脂,二水海藻糖溶液作为水相,多西他赛和磷脂溶于乙醇作为脂相,将脂相滴注于水相中搅拌即形成脂质体。将脂质体通过聚碳酸酯膜挤出以达到合适粒度,并将挤出后的脂质体进行冻干以进一步提高脂质体的稳定性。针对制备过程中可能影响药物稳定性的因素设计单因素试验。以脂质体粒径分布和包封率为指标,考察了磷脂组成、脂相浓度、水相糖溶液浓度、水相pH、脂相与水相比例和注入速度对脂质体物理性质的影响。最终确定多西他赛阳离子脂质体最佳处方和工艺条件。对在最佳处方和工艺下制备的脂质体进行质量研究,主要包括外观、pH值、渗透压、粒径分布、Zeta电位、包封率和含量等指标的测定。考察多西他赛阳离子脂质体混悬液24 h的稳定性和冻干品6个月的稳定性。建立血浆中多西他赛和DOTAP-Cl的检测方法并进行了方法学验证。以雄性Wistar大鼠为实验动物进行了药代动力学试验,对多西他赛阳离子脂质体体内行为进行了初步探索。分别尾部静脉注射多西他赛阳离子脂质体和泰索帝,给药剂量均为4mg·kg-1,给药速度为12mg·kg-1·min’1。MTT法进行体外药效试验,试验组包括多西他赛阳离子脂质体、空白阳离子脂质体和泰索帝。考虑到多西他赛临床主要应用于乳腺癌、卵巢癌和肺癌的治疗,采用MCF-7细胞(人乳腺癌)和A549细胞(人肺腺癌细胞)。在雌性BDF1小鼠左前肢腋部皮下接种LLC细胞(小鼠肺癌细胞)长成实体瘤,以此为动物模型进行多西他赛阳离子脂质体体内药效学研究,比较了多西他赛阳离子脂质体、空白阳离子脂质体和泰索帝的肿瘤抑制率。结果:通过试验确定最佳处方为:DOTAP-Cl、DOPC和多西他赛的摩尔比为50:43:7;总脂相浓度为1500 mM;水相为110 g/L的二水海藻糖溶液(pH4.5-5.5);脂相和水相体积比为1:74,注入速度为1.0mL/min;注入结束后进行挤出整粒;以水相为透析液透析八倍体积后分装冻干,冷藏储存。以最佳处方和工艺制备的脂质体为均一的白色冻干物,加水10 mL轻轻摇晃可快速复溶。三批平行样品复溶后物理性质接近,粒径为160 nm,粒度分布良好(PDI<0.1),pH(5.0)和渗透压(310mOsmol/Kg)符合注射剂标准,多西他赛浓度可达1mg/mL,包封率高达98%以上。脂质体复溶后在冷藏或冷冻条件下24 h内可保持稳定性,脂质体冻干品冷藏储存6个月后各项指标均无明显变化。药代动力学试验结果显示,多西他赛阳离子脂质体的多西他赛浓度-时间曲线与泰索帝相似,均在输液开始后1 min即达到最大值,随后迅速下降。而DOTAP-Cl浓度-时间曲线则在30 min时达到最高点,且5 min-60 min时间内浓度浮动不大,随后下降也较为缓和。体外药效试验结果显示,多西他赛阳离子脂质体、空白阳离子脂质体和泰索帝对MCF-7细胞和A549细胞均有抑制作用。在低浓度范围内多西他赛阳离子脂质体抑制效果稳定且优于泰索帝。体内药效学试验结果显示,试验结束时,多西他赛阳离子脂质体、泰索帝和空白阳离子脂质体对LLC细胞瘤的抑制率分别为为58.1%、29.6%及12.9%。多西他赛阳离子脂质体治疗效果显著优于泰索帝(P<0.01)。结论:阳离子脂质体工艺过程简单易控、多西他赛浓度达、包封率高、物理性质稳定;脂质体所含的多西他赛与泰索帝具有相似的体内药代动力学特征,剩余磷脂部分则分布较为缓慢;空白脂质体具有一定的肿瘤抑制效果,多西他赛阳离子脂质体治疗效果显著(P<0.01)优于泰索帝。