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目的:研究四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型中的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)4mRNA的表达变化以及慢性乙型肝炎、慢性肝硬化患者血浆中AngⅡ水平的变化,探讨AngⅡ、NOX4与肝纤维化、肝硬化发生机制的相关性;研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)贝那普利对肝纤维化大鼠AngⅡ水平及NOX4mRNA表达的影响。目的旨在探究各指标在肝纤维化中的作用以及贝那普利可能的抗肝纤维化的作用机制,望为临床抗肝纤维化的治疗提供一些新思路。方法:1.饲养SD雄性大鼠共22只,6周龄,健康清洁级,其体重约[(180-210)g],将其随机分为3个组:正常对照组(n=6),模型组(n=8),贝那普利预防治疗组(n=8)。除对照组外,模型组以及贝那普利预防治疗组均给予皮下注射40%CCl4油剂,2次/周,首次剂量5ml/kg,随后将剂量改为2ml/kg,同时对照组给予皮下注射相同剂量的油剂。从实验第1天开始贝那普利预防治疗组给予贝那普利(10mg·kg-1)灌胃,同时给予其余两组相同剂量的生理盐水灌胃,直到该实验的结束。三组大鼠均给予正常饮食。于第8周末,将正常对照组、模型组和贝那普利预防治疗组大鼠分别杀死6只,留取其同一部位肝组织以备用。对各组大鼠肝组织行常规HE以及Masson三色染色,随后于显微镜下观察各组大鼠肝脏的病理改变;制备各组肝组织匀浆,利用ABC-ELISA法测定各组肝匀浆AngⅡ的浓度;RT-PCR检测方法测定各组肝组织中NOX4mRNA的表达量。2.分别将正常健康者、慢性乙型肝炎患者、慢性肝硬化患者的血浆标本各收集20例,采用ELISA法分别测定各组血浆中AngⅡ的水平。结果:(1)肝组织的病理表现:正常对照组的肝小叶的结构正常,肝细胞索的排列顺序规则。模型组于第8周可见部分肝小叶结构变的紊乱,并由纤维间隔包绕肝细胞形成了假小叶。而贝那普利预防治疗组的大鼠肝纤维化的程度与模型组比较有所减轻。(2)利用ELISA方法测定的AngⅡ水平结果显示:模型组肝匀浆AngⅡ浓度(48.625±1.357 ng/ml)较正常对照组(23.330±1.606 ng/ml)明显升高(P<0.05),贝那普利预防治疗组肝匀浆AngⅡ浓度(45.518±3.072 ng/ml)较模型组(48.625±1.357 ng/ml)有所下降(P<0.05)。(3)利用RT-PCR方法测定的NOX4mRNA表达量结果显示:模型组肝组织NOX4 mRNA表达(31.78±3.96)较对照组(2.03±0.31)明显升高(P<0.05)。贝那普利预防治疗组肝组织NOX4 mRNA的表达(15.93±5.01)较模型组(31.78±3.96)明显下降(P<0.05)。(4)Spearman相关性分析显示:三组大鼠肝组织中肝匀浆AngⅡ水平与肝组织NOX4mRNA表达变化存在显著正相关(相关系数r=0.472,P<0.05)。(5)利用ELISA方法测定的各组血浆AngⅡ水平结果显示:慢性乙型肝炎组(59.98±12.97 pg/ml)以及慢性肝硬化组(90.81±28.45 pg/ml)患者血浆AngⅡ水平明显高于正常组(21.53±18.27pg/ml),其差异有统计学意义(P<0.05);慢性肝硬化组(90.81±28.45 pg/ml)患者血浆AngⅡ水平较慢性乙型肝炎组(59.98±12.97 pg/ml)明显升高,其差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)随着肝纤维化的形成,肝组织匀浆AngⅡ水平及肝组织NOX4mRNA表达水平升高,慢性乙型肝炎患者、慢性肝硬化患者血浆AngⅡ水平较健康正常者逐渐升高,这进一步表明肝纤维化的发生发展可能与AngⅡ、NOX4有关。(2)在肝纤维化形成过程中,NOX4mRNA表达与AngⅡ水平表现为正相关性。(3)进一步证实了贝那普利的抗肝纤维化作用,其抗纤维化作用可能是通过抑制AngⅡ水平并进一步抑制NOX4介导的氧化应激反应来实现。