论文部分内容阅读
【目的】 通过研究甲基硫氧嘧啶对大鼠骨髓基质细胞成骨分化和对细胞因子 G-CSF（粒细胞集落刺激因子）、GM-CSF（巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子）分泌水平的影响，探讨甲基硫氧嘧啶对骨髓微环境的毒性作用，为甲基硫氧嘧啶在临床使用中对造血系统的影响提供理论基础。 【方法】 1.提取SD大鼠骨髓基质细胞，全骨髓贴壁法传代培养，以P2代骨髓基质细胞为实验对象。 2.将甲基硫氧嘧啶用 PH为8的氢氧化钠溶液配置成终浓度为2 umo l/L、10umo l/L、50 umo l/L、250 umo l/L、1250 umo l/L的甲基硫氧嘧啶溶液。 3.茜素红染色比较成骨对照组与成骨实验组15天后成骨细胞的钙结节数。 4.碱性磷酸酶（ALP）试剂盒、骨钙素（OC）试剂盒检测不同浓度的甲基硫氧嘧啶溶液对大鼠BMSCs成骨分化中第3、6、9、12天分泌ALP、OG的影响。 5. RT-PCR法检测不同浓度甲基硫氧嘧啶对大鼠 BMSC的基因 RunX2和BMP2表达mRN A水平的影响。 6. ELIS A法检测不同浓度甲基硫氧嘧啶对大鼠 BMSC的 G-CSF、GM-CSF分泌水平的影响。 【结果】 1.成功获取并传代培养大鼠骨髓基质细胞。电子显微镜下，P0代骨髓基质细胞呈集落生长，传代后细胞呈长梭形、分布均匀，P4代后细胞逐渐老化。 2.成骨诱导组与对照组比较，成骨诱导组 ALP活性均增加。同一时间，随着甲基硫氧嘧啶浓度增加，ALP活性降低。在第3、6、9天，同一组 ALP活性逐渐增加，但第12天ALP活性降低。 3.在第3天~12天内，随着作用时间延长，同一组内骨钙素分泌量持续增加。在同一时间，成骨诱导实验组与成骨诱导阴性对照组相比，骨钙素分泌量减少，差异有统计学意义。但在同一时间，成骨诱导实验组组间比较，差异不完全有统计学意义。 4.随着甲基硫氧嘧啶浓度增加，基因 RunX2和 BMP2的 mRNA表达量逐渐减少。 5.低浓度组（2umo l/L、10 umo l/L）细胞因子G-CSF、GM-CSF分泌量逐渐增加，中高浓度组（50umo l/L、250 umo l/L、1250 umo l/L）分泌量逐渐减少。 【结论】 1.甲基硫氧嘧啶抑制骨髓基质细胞成骨分化，抑制 ALP活性和 OC分泌量，抑制基因RunX2和BMP2表达。 2.低浓度甲基硫氧嘧啶促进细胞因子 G-CSF、GM-CSF分泌，中高浓度甲基硫氧嘧啶抑制细胞因子G-CSF、GM-CSF分泌。 3.甲基硫氧嘧啶对骨髓微环境有一定毒性作用。