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【目的】 通过研究甲基硫氧嘧啶对大鼠骨髓基质细胞成骨分化和对细胞因子 G-CSF(粒细胞集落刺激因子)、GM-CSF(巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子)分泌水平的影响,探讨甲基硫氧嘧啶对骨髓微环境的毒性作用,为甲基硫氧嘧啶在临床使用中对造血系统的影响提供理论基础。 【方法】 1.提取SD大鼠骨髓基质细胞,全骨髓贴壁法传代培养,以P2代骨髓基质细胞为实验对象。 2.将甲基硫氧嘧啶用 PH为8的氢氧化钠溶液配置成终浓度为2 umo l/L、10umo l/L、50 umo l/L、250 umo l/L、1250 umo l/L的甲基硫氧嘧啶溶液。 3.茜素红染色比较成骨对照组与成骨实验组15天后成骨细胞的钙结节数。 4.碱性磷酸酶(ALP)试剂盒、骨钙素(OC)试剂盒检测不同浓度的甲基硫氧嘧啶溶液对大鼠BMSCs成骨分化中第3、6、9、12天分泌ALP、OG的影响。 5. RT-PCR法检测不同浓度甲基硫氧嘧啶对大鼠 BMSC的基因 RunX2和BMP2表达mRN A水平的影响。 6. ELIS A法检测不同浓度甲基硫氧嘧啶对大鼠 BMSC的 G-CSF、GM-CSF分泌水平的影响。 【结果】 1.成功获取并传代培养大鼠骨髓基质细胞。电子显微镜下,P0代骨髓基质细胞呈集落生长,传代后细胞呈长梭形、分布均匀,P4代后细胞逐渐老化。 2.成骨诱导组与对照组比较,成骨诱导组 ALP活性均增加。同一时间,随着甲基硫氧嘧啶浓度增加,ALP活性降低。在第3、6、9天,同一组 ALP活性逐渐增加,但第12天ALP活性降低。 3.在第3天~12天内,随着作用时间延长,同一组内骨钙素分泌量持续增加。在同一时间,成骨诱导实验组与成骨诱导阴性对照组相比,骨钙素分泌量减少,差异有统计学意义。但在同一时间,成骨诱导实验组组间比较,差异不完全有统计学意义。 4.随着甲基硫氧嘧啶浓度增加,基因 RunX2和 BMP2的 mRNA表达量逐渐减少。 5.低浓度组(2umo l/L、10 umo l/L)细胞因子G-CSF、GM-CSF分泌量逐渐增加,中高浓度组(50umo l/L、250 umo l/L、1250 umo l/L)分泌量逐渐减少。 【结论】 1.甲基硫氧嘧啶抑制骨髓基质细胞成骨分化,抑制 ALP活性和 OC分泌量,抑制基因RunX2和BMP2表达。 2.低浓度甲基硫氧嘧啶促进细胞因子 G-CSF、GM-CSF分泌,中高浓度甲基硫氧嘧啶抑制细胞因子G-CSF、GM-CSF分泌。 3.甲基硫氧嘧啶对骨髓微环境有一定毒性作用。