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凝血酶和凝血因子Xa (FXa)是凝血系统中重要的两个凝血因子,本研究分别探讨凝血酶和凝血因子Xa对Meg-01细胞分化为血小板的作用机制。凝血酶是一种有丝分裂原,可以诱导多种细胞功能。我们先以凝血酶为激动剂,研究了凝血酶在Meg-01细胞分化为血小板样颗粒中的作用及其机制。使用TPO作为阳性对照,采用CCK-8法检测Meg-01细胞增殖活性；采用AlamaBlue试剂盒分析血小板样颗粒活性；通过荧光定量PCR检测GATA-1、Bcl-2、PAR1和PAR4的mRNA水平的表达；通过Western blot检测MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路及PTEN表达水平；巨核细胞分化标志蛋白CD41b的表达采用Western blot和流式细胞术两种方法检测；巨核细胞和血小板标志性糖蛋白CD61的表达、细胞周期变化和细胞凋亡情况采用流式细胞术进行检测；以ADP作为激活剂,在显微镜下观察血小板样颗粒的聚集状态。结果表明：Meg-01细胞的CD61阳性率高达92.4%。凝血酶刺激后Meg-01细胞产生了伪足和血小板样颗粒物。凝血酶可抑制Meg-01细胞的增殖,促进其凋亡,诱导细胞周期阻滞在G0/G1期。凝血酶上调了控制巨核细胞发育成熟的细胞转录因子GATA-1、凝血酶受体PAR1和PAR4的mRNA表达,下调了凋亡抑制蛋白Bcl-2的mRNA水平。凝血酶促进CD41b表达升高,下调PTEN的表达并上调ERK和AKT磷酸化水平。经凝血酶诱导产生的血小板样颗粒具有活性,并能发生聚集反应。由此可见,凝血酶可能在巨核细胞分化为血小板的过程中发挥一定的作用。FXa和凝血酶同样是凝血系统中关键的凝血因子,Fxa是一种丝氨酸蛋白酶,既然凝血酶可能在巨核细胞分化为血小板的过程中发挥一定的作用,且这种作用可能是通过PARs进行,那么Fxa可能也通过激活PARs对巨核细胞分化产生一定影响。因此,接着探讨了Fxa在成巨核细胞白血病细胞Meg-01细胞分化为血小板样颗粒中的作用及其机制。采用CCK-8法检测Meg-01细胞增殖活性；采用AlamaBlue试剂盒分析血小板样颗粒活性；通过流式细胞术检测细胞周期变化和细胞凋亡情况；周期相关蛋白Skp2的表达和MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路通过Western blot检测；巨核细胞分化标志蛋白CD41b表达采用Western blot和流式细胞术检测。结果表明：Fxa也能促进巨核细胞产生伪足和血小板样颗粒。FXa抑制Meg-01细胞的增殖,促进其凋亡,还可以触发细胞G2/M期阻滞并下调Skp2蛋白表达。Fxa促进CD41b表达并提高ERK和AKT磷酸化水平。Meg-01细胞经Fxa刺激后产生了有活性的血小板样颗粒。由此可见,FXa也可能在巨核细胞分化为血小板的过程中发挥一定的作用。综上所述,凝血酶和FXa都能够改变Meg-01细胞形态,刺激Meg-01细胞产生伪足和血小板样颗粒,抑制Meg-01细胞增殖,促进凋亡。因此二者可能在巨核细胞分化为血小板过程中均有发挥一定的作用。