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目的:Mi RNA是近年来发现的长约19-25个核苷酸的非编码小RNA,表达具有明显的组织特异性,且与肿瘤的发生发展密切相关。研究发现mi RNA可以调控造血细胞生成,并改变细胞增殖、分化及凋亡。Mi RNA-21是mi RNA家族中的重要成员之一,通过调控靶基因及下游信号通路,调控肿瘤发生。已知抑癌基因10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物PTEN为mi RNA-21的靶基因之一,具有抑癌活性,且PTEN可以负调控PI3K/AKT通路活性,从而抑制血管新生并降低肿瘤细胞的增殖及侵袭。在白血病的发生发展中,PTEN-PI3K/AKT通路起到了重要作用。白血病是一种起源于骨髓多能干细胞的恶性克隆增生性疾病。其主要表现为细胞恶性增殖、分化障碍、凋亡受阻等,使肿瘤细胞在骨髓及其他造血系统堆积,并可以浸润其他组织及器官,影响正常造血功能。随着近年来对白血病发病机制的不断研究,越来越多的肿瘤信号通路被发现,其中以PI3K/AKT介导的信号通路成为白血病发病及治疗的研究热点。本实验旨在K562细胞中转染mi RNA-21抑制物inhibitor,通过MTT和流式细胞仪技术分析mi RNA-21下调后对K562细胞增殖及早期凋亡的影响;并检测细胞转染后PTEN-PI3K/AKT通路相关基因表达变化,进一步通过Western blot检测mi RNA-21与PTEN蛋白表达的相关性。方法:体外培养K562细胞,将细胞分为4组,分别为:空白组、转染组、随机序列对照组、荧光素对照组。通过电转染,将化学合成的mi RNA-21 inhibitor转染对数增长期的K562细胞,通过荧光倒置显微镜观察细胞形态,检测细胞转染率,MTT及流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡的变化,RT-PCR及Western-blot检测PTEN-PI3K/AKT通路表达变化。结果:1 RT-PCR方法检测mi RNA-21 inhibitor在K562细胞系中的转染效率RT-PCR结果显示,mi RNA-21 inhibitor转染K562细胞后mi RNA-21在转染组、随机序列对照组及荧光素对照组相对空白组表达比例分别为(8.070±5.138)%、(91.600±2.452)%、(92.247±2.053)%,转染组mi RNA-21表达较其他三组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2 Mi RNA-21 inhibitor封闭mi RNA-21表达对K562细胞增殖的影响在转染12h、24h、36h、48h、60h后,应用MTT检测细胞增殖抑制率,相对于空白组细胞,不同时间段转染组细胞增殖抑制率分别为(2.6±0.4)%、(8.1±1.0)%、(15.5±1.4)%、(29.1±2.2)%、(43.1±3.1)%,随机序列对照组细胞增殖抑制率分别为(3.6±0.5)%、(7.6±0.9)%、(4.6±0.7)%、(4.3±0.6)%、(3±0.5)%,荧光素对照组细胞增殖抑制率分别为(2.9±0.3)%、(2.8±0.4)%、(5.6±1.0)%、(4.1±0.6)%、(5.7±0.9)%。转染组K562细胞增殖明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。3 Mi RNA-21 inhibitor封闭mi RNA-21表达对K562细胞凋亡的影响流式细胞仪结果显示,转染48h后空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组细胞凋亡率分别为(2.334±0.263)%、(13.370±0.250)%、(3.990±0.436)%、(2.894±0.352)%,转染组中凋亡细胞百分比显著高于其他三组,差异有统计学意义(P<0.05)。4抑制mi RNA-21后K562细胞PTEN基因表达变化PTEN蛋白在空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组的相对表达量分别为(4.911±0.450)、(14.701±0.810)、(4.733±0.524)和(4.271±0.682),转染组PTEN蛋白表达较其他三组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。5抑制mi RNA-21后K562细胞PI3K蛋白表达变化PI3K蛋白在空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组的相对表达量分别为(3.343±0.201)、(1.015±0.122)、(3.220±0.111)和(3.439±0.098),转染组PI3K蛋白表达较其他三组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。6抑制mi RNA-21后K562细胞磷酸化AKT(p-AKT)基因表达变化P-AKT蛋白在空白组、转染组、随机序列对照组及荧光素对照组的相对表达量分别为(3.040±0.094)、(0.463±0.080)、(3.628±0.103)和(3.447±0.139),转染组p-AKT蛋白表达较其他三组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1抑制mi RNA-21表达诱导K562细胞早期凋亡,抑制K562细胞增殖。2抑制mi RNA-21可以通过上调PTEN表达而抑制PI3K/AKT信号通路,从而发挥其抗细胞增殖及促凋亡作用。