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太子参为石竹科(Caryophyllaceae)异叶假繁缕属植物Pseudostellaria heteroph-ylla(Miq.) Pax的干燥块根,具有补益脾肺,益气生津的作用。现代药理研究表明,太子参具有增强免疫、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒及清除自由基等作用。由于太子参野生资源日渐减少,市场需求量却逐年增加,现市场上多为栽培品种。“宣参1号”为安徽省宣州市选育的优良太子参新品种,在生产上极具竞争力,但由于“宣参1号”属高不育型品种,病毒病发生严重,原有的优良性状减退。课题组前期运用植物细胞无融合技术改善太子参内在品质,培育出了“宣参1号”的脱毒组培苗株。本论文采用现代分析技术方法从有效成分的提取工艺及含量测定、HPLC-ESI-MSn指纹图谱和聚类分析方面对“宣参1号”、“宣参1号”的脱毒组培株进行质量评价研究。同时运用药理学研究方法比较了“宣参1号”、“宣参1号”的脱毒组培株对脾虚小鼠免疫功能的影响。为太子参药材质量的综合评价和宣州太子参GAP实施提供科学依据。主要研究内容与主要结论: 1.太子参多糖及总皂苷的提取工艺研究。采用正交设计优化了太子参多糖和皂苷的提取工艺。结果表明,太子参多糖的最佳提取工艺为:提取温度为90℃,料液比为1∶25,提取时间为3h,回流提取2次。太子参皂苷的最佳提取工艺为:乙醇浓度为70%,乙醇用量为8倍量,提取次数为3次,提取时间为2h。通过验证实验证明,多糖和皂苷的提取工艺合理可行。 2.“宣参1号”及其脱毒组培株与不同产地太子参有效成分的测定。分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定了17个样品的多糖、皂苷和太子参环肽A、B的含量。通过实验结果及分析可以得到17个太子参样品中太子参环肽A、B含量以“宣参1号”脱毒株含量最高为0.0039%、0.030%。太子参总皂苷含量以“宣参1号”脱毒株最高为1.231%,其次是福建柘荣和“宣参1号”分别为0.754%、0.735%,安徽铜陵样品最低为0.323%。各地太子参样品多糖含量均高于5%,其中“宣参1号”脱毒株的多糖含量为9.30%比“宣参1号”8.31%高。综合这几类成分含量结果分析我们发现“宣参1号”脱毒株的药材品质比“宣参1号”优良,而且同时将两者的有效成分含量与其他不同产地的太子参比较,“宣参1号”通过植物细胞组织培养技术得到的脱毒株的品质具有显著优势。 3.太子参HPLC-ESI-MSn指纹图谱研究及聚类分析。采用高效液相色谱与质谱联用技术初步建立了17个不同产地太子参样品的10个共有峰的太子参指纹图谱,同时对这10个特征峰的化学成分进行了成分定性归属,初步鉴定了8个特征性化学成分,分别是芹菜素-6-C-葡萄糖-8-C邛可拉伯糖苷、Pseudostellarin B、Pseudostellarin A、Heterophyllin B、Heterophyllin A、Pseudostellarin G、Pseudostellarin E。然后运用SPSS软件对17个不同样品进行指纹图谱的聚类分析,这17个样品聚成三类。江苏、安徽、贵州三个产地的样品聚为一类,福建柘荣聚为一类,“宣参1号”脱毒株分为一类,其原因可能是脱毒植物组织培养后优良性状得到突显使得各类化学成分含量发生了较大变化。 4.“宣参1号”及其脱毒组培株与不同产地太子参对脾虚证小鼠免疫功能的影响。采用大黄苦寒泻下的作用建立小鼠的脾虚症模型,通过小鼠免疫器官指数及血象指标的比较评价不同产地太子参质量。结果发现,造模后给药组小鼠的体重指数、脾脏指数及胸腺指数都显著升高,血象的各项指标均有所恢复。由此可见,“宣参1号”、“宣参1号”脱毒株与其他产地太子参均有提高脾虚小鼠免疫功能的作用,且效果相当。